大鼠外周血單核細胞公司正在出售的產品：冰凍切結締組織（CONNECTIVE TISSUE）改良格莫瑞 50次
三色（MGT）染色試劑盒
Oil red O or Sudan black
Dystrophin
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石蠟切神經組織金屬鋅蒂姆（TIMM）染色試劑盒 10次
冰凍切神經
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產品名稱 | 大鼠外周血單核細胞 |
規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 |
分類 | 原代細胞 |
貨號 | GOY-01X1238 |
商品介紹：
名稱 大鼠外周血單核細胞 2.組織來源：外周血 3.產品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介： 大鼠外周血單核細胞分離自外周血；外周血是除骨髓之外的血液，臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細胞釋放到血液中，再在從血液中提取分離得到造血干細胞，我們把這樣得到的干細胞稱為外周血干細胞，在二十一世紀初人類開始的生命方舟計劃中提出外周血這一新概念。單核細胞起源于骨髓中的造血干細胞，并在骨髓中發(fā)育。當它們從骨髓進入血液時仍然是尚未成熟的細胞。與其他血細胞比較，單核細胞內含有更多的非特異性脂酶，并且具有更強的吞噬作用。單核細胞在血液中停留2-3天后遷移到周圍組織中，細胞體積繼續(xù)增大，直徑可達50-80μm，細胞內所含的溶酶體顆粒和線粒體的數目也增多，成為成熟的細胞。固定在組織中的單核細胞稱為組織巨噬細胞，它們經常大量存在于淋巴結、肺泡壁、骨髓、肝和脾等器官。激活了的單核細胞和組織巨噬細胞能生成并釋放多種細胞毒、干擾素和白細胞介素，參與機體防衛(wèi)機制，還產生一些能促進內皮細胞和平滑肌細胞生長的因子。在炎癥周圍單核細胞能進行細胞分裂，并包圍異物。 5.方法簡介： ()實驗室分離的大鼠外周血單核細胞采用密度梯度離心法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質量檢測： ()實驗室分離的大鼠外周血單核細胞經CD14免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產品貨號CM-R184 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態(tài)巨噬細胞樣 傳代特性不增殖；不傳代 消化液0.25% 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
使用方法：
收到細胞后，請按照以下方法進行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時或者過夜，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 待細胞達到80%匯合時準備進行傳代培養(yǎng)。
3. 細胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次；
2) 添加0.125%消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中，37℃溫浴3min左右；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入*培養(yǎng)液終止消化；
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3等適當的比例進行接種傳代，然后補充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL，放入37℃，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4) 待細胞*貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。
培養(yǎng)操作：
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數板計數。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據細胞數量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
1瓶 TG-905細胞株 TG-905 低溫運輸和保存
MKTTn肉湯（ISO） MKTTn Broth 250g
100UN β- 葡萄糖苷 β-Glucosidase 4℃保存
50T 副傷寒桿菌PCR檢測試劑盒 低溫運輸，-20℃保存
5g 纖維二糖 D-(+)-Cellobiose 室溫保存
2 ug SuperTopFlash SuperTopFlash 低溫運輸，-20℃保存
1只 硅膠膜離心吸附柱（大提）收集管
2 ug pAcGFP-N1 pAcGFP-N1 低溫運輸，-20℃保?嵌?L?
大鼠外周血單核細胞創(chuàng)傷弧菌成套生化鑒定管 9種*2套/盒*5盒
c-Maf 原基因cMAF抗體 規(guī)格: 0.2mlV5 tag V5 tag標簽抗體 規(guī)格: 0.1ml
PNPO 磷酸吡哆醇氧化抗體 規(guī)格: 0.2mlSLAMF9 CD2F-10抗體 規(guī)格: 0.2ml
Aldolase A 醛A抗體 規(guī)格: 0.1ml
2 ug pRFP-GFP-LC3 pRFP-GFP-LC3 低溫運輸，-20℃保存
胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基（TSA）（2015藥典） Tryptose Soya Agar 250g
2 ug pCRE-Luc pCRE-Luc 低溫運輸，-20℃保存
50T 病毒H7亞型PCR檢測試劑盒 低溫運輸，-20℃保存
50次 柱式植物RNAout Column Plant RNAOUT 4℃保存
1瓶 CHO-K1細胞株 CHO-K1 低溫運輸和保存
50T 大腸桿菌PCR檢測試劑盒 低溫運輸，-20℃保存
1mL 2X PCR Mix（即用型PCR試劑盒3.0） Instant PCR Kit 3.0 -20℃保存
