小鼠鞏膜成纖維細胞公司正在出售的產(chǎn)品：3,4-二啡?？鼘幩? 14534-61-3 規(guī)格： HPLC≥98%，20mg/vial 訂購|咨詢
金絲桃苷 482-36-0 規(guī)格： HPLC≥98%，20mg/vial 訂購|咨詢
黃芪總皂甙 17429-69-5 規(guī)格： UV≥98%，20mg/vial 訂購|咨詢
甲基橙皮甙 11013-97-1 規(guī)格： HPLC≥9
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產(chǎn)品名稱 | 小鼠鞏膜成纖維細胞 |
規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 |
分類 | 原代細胞 |
貨號 | GOY-01X1420 |
商品介紹：
名稱 小鼠鞏膜成纖維細胞 2.組織來源：鞏膜組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介： 小鼠鞏膜成纖維細胞分離自鞏膜組織，鞏膜是眼球壁的主要組成之一。是眼球纖維膜的后5/6部分。前方聯(lián)接角膜，后方與視神經(jīng)的鞘膜延續(xù)。鞏膜在視神經(jīng)穿出部附近最厚，愈前愈薄，在肌腱附著處又復(fù)增厚。其與角膜交界處，外面有環(huán)形的角膜溝，深部有鞏膜靜脈竇。小兒的鞏膜為淺藍色，成年為白色，老年因脂肪沉著而帶黃色。鞏膜結(jié)構(gòu)堅韌，有支持和保護眼內(nèi)組織的作用。成纖維細胞是疏松結(jié)締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質(zhì)細胞分化而來；成纖維細胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現(xiàn)跟纖維細胞的互相轉(zhuǎn)化；成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的肺成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細胞基本貼壁*，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質(zhì)透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。 5.方法簡介： ()實驗室分離的小鼠鞏膜成纖維細胞采用混合膠原酶消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測： ()實驗室分離的小鼠鞏膜成纖維細胞經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-M320 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態(tài)成纖維細胞樣 傳代特性可傳1-3代左右 消化液0.25% 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
使用方法：
收到細胞后，請按照以下方法進行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時或者過夜，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 待細胞達到80%匯合時準備進行傳代培養(yǎng)。
3. 細胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次；
2) 添加0.125%消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中，37℃溫浴3min左右；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入*培養(yǎng)液終止消化；
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3等適當?shù)谋壤M行接種傳代，然后補充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL，放入37℃，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4) 待細胞*貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。
培養(yǎng)操作：
1）復(fù)蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
小鼠尾型同源盒轉(zhuǎn)錄因子2(CDX2)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
小鼠微囊蛋白1(CAV1)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
小鼠CCAAT增強子結(jié)合蛋白Delta(CEBPD)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
小鼠著絲粒蛋白A(CENPA)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
小鼠細胞分裂蛋白24(CDC24)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
小鼠著絲粒蛋白B(CENPB)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
小鼠著絲粒蛋白E(CENPE)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
小鼠著絲粒蛋白H(CENPH)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
小鼠著絲粒蛋白I(CENPI)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
小鼠中心體蛋白
小鼠鞏膜成纖維細胞M17肉湯進口、國產(chǎn)M17 Broth用于牛奶和乳制品中乳酸菌檢測和分離培養(yǎng)(Merck方法)250兔白介素7(IL7)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
乳酸桿菌選擇性瓊脂進口、國產(chǎn)Lactobacillus Selective Agar用于乳酸菌檢測和分離培養(yǎng)(ACUMEDIA)250兔白介素-5(IL-5)免疫試劑盒*直銷
APT 瓊脂進口、國產(chǎn)APT Agar用于乳酸菌分離培養(yǎng)250兔白介素17(IL-17)免疫試劑盒進口、組裝
雙歧桿菌BS培養(yǎng)基進口、國產(chǎn)用于雙歧桿菌分離培養(yǎng)250兔白介素12(IL-12/P70)免疫試劑盒進口、分裝
BL瓊脂培養(yǎng)基進口、國產(chǎn)BL medium用于雙歧桿菌分離培養(yǎng)(GB標準)250兔白蛋白(Albumin)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
BBL瓊脂培養(yǎng)基進口、國產(chǎn)BBL medium用于雙歧桿菌分離培養(yǎng)(GB標準)250兔阿(ADR)免疫試劑盒*直銷
TPY瓊脂培養(yǎng)基進口、國產(chǎn)TPY medium用于雙歧桿菌分離培養(yǎng)(GB標準)250兔γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移1(GGT1)免疫試劑盒進口、組裝
PYG 液體培養(yǎng)基基礎(chǔ)進口、國產(chǎn)PYG Broth Base用于雙歧桿菌增菌培養(yǎng)，使用時需加入氯化血紅素和K1(GB標準)250兔β內(nèi)啡肽(β-EP)免疫試劑盒進口、分裝
胰酪胨大豆酵母浸膏肉湯(TSB-YE) 進口、國產(chǎn)Trypticase Soy-Yeast Extract Broth用于單增李氏菌增菌培養(yǎng)（SN、GB標準）250兔β淀粉樣蛋白1-40(Aβ1-40)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
萘啶酮酸進口、國產(chǎn)每支添加于225ml HB4150、HB4192中（SN、GB標準）10mg/支*5兔S100-A5蛋白(S100A5)免疫試劑盒*直銷
