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哺乳動物種屬鑒定 PCR Mix100 次保存

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更新時(shí)間:2017-07-17 14:21:34瀏覽次數(shù):110次

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哺乳動物種屬鑒定 PCR Mix100 次保存是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機(jī)率引入隨機(jī)引入突變。

哺乳動物種屬鑒定 PCR Mix100 次保存使用方法:
1. 30 uL 的標(biāo)準(zhǔn) PCR 反應(yīng)體系為例,如果反應(yīng)體系不是 30 uL,各成分需要等按比例增加或減少。在一干凈的 PCR 管中,加入下列成分:易錯(cuò) PCR Mix, 10× 3 uL 易錯(cuò) PCR dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自備 DNA 模板(10ng/uL 1 uL PCR 引物(自備,10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶(5U/uL 1 -5 U 補(bǔ)水到 30 uL
2.
按已經(jīng)優(yōu)化的 PCR 條件進(jìn)行一定循環(huán)數(shù)的 PCR(循環(huán)數(shù)與突變率的關(guān)系見下表),然后取 5 uL 電泳檢查。如果沒有優(yōu)化的 PCR 條件,一般可以先嘗試下面的 PCR 條件: PCR 前變性 94 3 分鐘易錯(cuò) PCR 94 1 分鐘 45 1 分鐘 循環(huán) 30 次(見注) 72 1 分鐘注:易錯(cuò) PCR 一般不需要熱啟動,也不需要在 PCR 結(jié)束后做延伸處理。
哺乳動物種屬鑒定 PCR Mix100 次保存產(chǎn)品及特點(diǎn):
易錯(cuò) PCRerror-prone PCR)是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機(jī)率引入隨機(jī)引入突變。如果有適當(dāng)?shù)倪x擇方法,則可從構(gòu)建的突變庫選出所需突變體。易錯(cuò) PCR 和常規(guī) PCR 的比較如下:本產(chǎn)品就是專門為廣大的研究工作者進(jìn)行易錯(cuò) PCR 而開發(fā),本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn):
1. 即開即用,十分簡單方便,尤其在生物制藥和酶學(xué)研究領(lǐng)域顯示出了它的*性。
2. 配方經(jīng)過精心優(yōu)化,突變率穩(wěn)定,突變沒有趨向性。易錯(cuò) PCR 的突變率為 0.66% ±0.13%),詳見使用手冊疑難解答。
3. 比體內(nèi)基因突變更快捷簡單,但如果在 PCR 引物中設(shè)計(jì)位點(diǎn),則可使產(chǎn)物克隆到表達(dá)載體,也可以用于體內(nèi)蛋白活性的篩選。
4. 可用于連續(xù)易錯(cuò) PCRsequential error-prone PCR),只需把上一次易錯(cuò) PCR 的產(chǎn)物用作下一次易錯(cuò) PCR 的模板即可,使每一次獲得的小突變累積而產(chǎn)生重要的有益突變。
5. 只適用于擴(kuò)增 1kb 以下的產(chǎn)物,對于 1kb 以上的產(chǎn)物,建議分段擴(kuò)增。
哺乳動物種屬鑒定 PCR Mix100 次保存DNA 擴(kuò)增效率下降;
溫度低產(chǎn)量高,但過低可造成引物與模板 錯(cuò)配,非特異性產(chǎn)物增加。合適的退火溫度一般在 45~68之間。設(shè)置特定反應(yīng)的 適退火溫度,可根據(jù)引物的(G+C%含量進(jìn)行推測,一般實(shí)驗(yàn)中退火溫度比擴(kuò)增引 物的熔解溫度 Tm 5,退火時(shí)間一般為 30~60 秒,足以使引物與模板之間*結(jié) 合,長時(shí)間退火沒有必要。
13,14-dihydro-15-keto Prostaglandin F1α 1 mg     9。alpha。,11。alpha。-dihydroxy-15-oxo-prostan-1-oic acid; 13,14-dihydro-15-keto PGF1α; 1314-dihydro-15-keto Prostaglandin F1α

MMB2201 5 mg     I-AMB; methyl 1-5-fluoropentyl-1H-indole-3-carbonyl-L-valinate

聚*酯20(吐溫20)(500ML     Polysorbate 20 TWEEN 20, Cas: 9005-64-5

FDU-PB-22 1 mg     naphthalen-1-yl 1-4-fluorobenzyl-1H-indole-3-carboxylate FDU-PB-22

Prostaglandin A2 methyl ester 10 mg     15S-hydroxy-9-oxo-methyl ester-prosta-5Z,1013E-trien-1-oic acid; PGA2 methyl ester|Medullin methyl ester; Prostaglandin A2 methyl ester

Halochondrine A potewwium Salt; OA     Okadaic acid, potewwium Salt
NADPH Standard 1 ea     NADPH Standard

*基化組蛋白H3K4多肽     Trimethyl Histone H3K4 Peptide 100 ul

3-Methyladenine 100 mg     3-methyl-3H-purin-6-amine NSC 66389|3-MA; 3-Methyladenine

Ivacaftor 10 mg     Kalydeco|VX 770; N-

SIRT1/2 Inhibitor IV 1 mg     2,3-dihydro-5-[2-hydroxy-1-naphthalenylmethyl]-6-phenyl-2-thioxo-41H-pyrimidinone Cambinol|NSC 112546|SIRT1 Inhibitor II|SIRT2 Inhibitor VI; SIRT1/2 Inhibitor IV

Δ12-Prostaglandin J2 Lipid Maps MS Standard (5 mg)     Δ12-PGJ2, Δ12-Prostaglandin J2 Lipid Maps MS Standard, 11-oxo-15S-hydroxy-prosta-5Z,9,12E-trien-1-oic acid
8-Isoprostane Affinity Column 4 ml 1 ea     8-epi Prostaglandin F2α|8-iso Prostaglandin F2α; 8-Isoprostane Affinity Column 4 ml

n-Dodecyl-β-D-maltoside 1 g     DDM|Dodecyl Maltoside; dodecyl 4-O-α-D-glucopyranosyl-β-D-glucopyranoside

yenine 5疊氮化物 [相當(dāng)于Cy5疊氮化物]     yenine 5 azide [equivalent to Cy5 azide]

Topiramate 100 mg     23:4,5-bis-O-1-metxyletxylidene-β-D-fructopyranose 1-sulfamate Topamax |TPM|Epitomax|McN 4853|RWJ 17021; Topiramate

5S),6R),15R-Lipoxin A4 250 ug     5S),6R),15R-trixy7noxy-7E,9E11Z,13E-eicosatetraenoic acid 5S),6R),15R-LXA4|AT-Lipoxin A4|15-epi Lipoxin A4; 5S),6R),15R-Lipoxin A4

metxylenesuccinic acid 2-Propene-1,2-dicarboxylic acid     Itaconic acid
改良*卵黃多粘菌素瓊脂基礎(chǔ)250g用于蠟樣芽孢桿菌分離培養(yǎng)和計(jì)數(shù)

心浸液瓊脂 Heart Infusion Agar 用于培養(yǎng)營養(yǎng)要求高的微生物

麥康凱瓊脂3 Maconkey Agar No.3 250 用于腸道致病菌的選擇性分離、培養(yǎng)(OXOID方法)

沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基250g/瓶用于真菌培養(yǎng)和檢測incubationmedia沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基250g/瓶用于真菌培養(yǎng)和檢測

LST-MUG
H-頂層培養(yǎng)基250g用于鼠傷寒沙門氏桿菌回復(fù)突變試驗(yàn)(Ames試驗(yàn))

C.L.E.DMedium

VRBG 瓊脂 VRBGA Agar 250 用于奶粉中坂崎桿菌的分離培養(yǎng)(FDA方法)

溴甲酚紫瓊脂基礎(chǔ)(糖發(fā)酵基礎(chǔ))250g/瓶選擇性添加0.5-用于細(xì)菌的分離和鑒別incubationmedia溴甲酚紫瓊脂基礎(chǔ)(糖發(fā)酵基礎(chǔ))250g/瓶選擇性添加0.5-用于細(xì)菌的分離和鑒別

GVPCAgarBase
哺乳動物種屬鑒定 PCR Mix100 次保存氣單胞菌培養(yǎng)基基礎(chǔ)250g用于氣單胞菌分離培養(yǎng)

50160 蛋白胨 BR 1 微生物發(fā)酵原材料,提供氮源 incubation media 50160 蛋白胨 BR 1 微生物發(fā)酵原材料,提供氮源

粉紅單端孢霉 /

GVPCAgarBase

SDAYMedium

哺乳動物種屬鑒定 PCR Mix100 次保存變性溫度與時(shí)間:
模板變性溫度是決定 PCR 反應(yīng)中雙鏈 DNA 解鏈的溫度,達(dá)不到變 性溫度就不會產(chǎn)生單鏈 DNA 模板,PCR 也就不會啟動。變性溫度低則變性不*, DNA 雙鏈會很快復(fù)性,因而減少產(chǎn)量。變性溫度太高,又會影響酶的活性。一般情況 下可設(shè)為 94 20~30 秒,高溫時(shí)間應(yīng)盡量縮短,以保持耐熱 DNA 聚合酶的活力, 高變性溫度不宜超過 95 退火溫度與時(shí)間:退火溫度決定 PCR 特異性與產(chǎn)量。溫度高特異性強(qiáng),但過高則引物 不能與模板牢固結(jié)合

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