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CTP 溶液,100mM0.25mL運(yùn)輸

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更新時(shí)間:2017-07-17 14:12:10瀏覽次數(shù):168次

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CTP 溶液,100mM0.25mL運(yùn)輸是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對(duì)功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機(jī)率引入隨機(jī)引入突變。

CTP 溶液,100mM0.25mL運(yùn)輸詳細(xì)說(shuō)明書:

CTP 溶液,100mM0.25mL運(yùn)輸產(chǎn)品及特點(diǎn):
易錯(cuò) PCRerror-prone PCR)是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對(duì)功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機(jī)率引入隨機(jī)引入突變。如果有適當(dāng)?shù)倪x擇方法,則可從構(gòu)建的突變庫(kù)選出所需突變體。易錯(cuò) PCR 和常規(guī) PCR 的比較如下:本產(chǎn)品就是專門為廣大的研究工作者進(jìn)行易錯(cuò) PCR 而開發(fā),本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn):
1. 即開即用,十分簡(jiǎn)單方便,尤其在生物制藥和酶學(xué)研究領(lǐng)域顯示出了它的*性。
2. 配方經(jīng)過(guò)精心優(yōu)化,突變率穩(wěn)定,突變沒(méi)有趨向性。易錯(cuò) PCR 的突變率為 0.66% ±0.13%),詳見使用手冊(cè)疑難解答。
3. 比體內(nèi)基因突變更快捷簡(jiǎn)單,但如果在 PCR 引物中設(shè)計(jì)位點(diǎn),則可使產(chǎn)物克隆到表達(dá)載體,也可以用于體內(nèi)蛋白活性的篩選。
4. 可用于連續(xù)易錯(cuò) PCRsequential error-prone PCR),只需把上一次易錯(cuò) PCR 的產(chǎn)物用作下一次易錯(cuò) PCR 的模板即可,使每一次獲得的小突變累積而產(chǎn)生重要的有益突變。
5. 只適用于擴(kuò)增 1kb 以下的產(chǎn)物,對(duì)于 1kb 以上的產(chǎn)物,建議分段擴(kuò)增。
CTP 溶液,100mM0.25mL運(yùn)輸變性溫度與時(shí)間:
模板變性溫度是決定 PCR 反應(yīng)中雙鏈 DNA 解鏈的溫度,達(dá)不到變 性溫度就不會(huì)產(chǎn)生單鏈 DNA 模板,PCR 也就不會(huì)啟動(dòng)。變性溫度低則變性不*, DNA 雙鏈會(huì)很快復(fù)性,因而減少產(chǎn)量。變性溫度太高,又會(huì)影響酶的活性。一般情況 下可設(shè)為 94 20~30 秒,高溫時(shí)間應(yīng)盡量縮短,以保持耐熱 DNA 聚合酶的活力, 高變性溫度不宜超過(guò) 95。 退火溫度與時(shí)間:退火溫度決定 PCR 特異性與產(chǎn)量。溫度高特異性強(qiáng),但過(guò)高則引物 不能與模板牢固結(jié)合.
CTP 溶液,100mM0.25mL運(yùn)輸DNA 擴(kuò)增效率下降;
溫度低產(chǎn)量高,但過(guò)低可造成引物與模板 錯(cuò)配,非特異性產(chǎn)物增加。合適的退火溫度一般在 45~68之間。設(shè)置特定反應(yīng)的 適退火溫度,可根據(jù)引物的(G+C%含量進(jìn)行推測(cè),一般實(shí)驗(yàn)中退火溫度比擴(kuò)增引 物的熔解溫度 Tm 5,退火時(shí)間一般為 30~60 秒,足以使引物與模板之間*結(jié) 合,長(zhǎng)時(shí)間退火沒(méi)有必要。
CTP 溶液,100mM0.25mL運(yùn)輸使用方法:
1. 30 uL 的標(biāo)準(zhǔn) PCR 反應(yīng)體系為例,如果反應(yīng)體系不是 30 uL,各成分需要等按比例增加或減少。在一干凈的 PCR 管中,加入下列成分:易錯(cuò) PCR Mix, 10× 3 uL 易錯(cuò) PCR dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自備 DNA 模板(10ng/uL 1 uL PCR 引物(自備,10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶(5U/uL 1 -5 U 補(bǔ)水到 30 uL
2.
按已經(jīng)優(yōu)化的 PCR 條件進(jìn)行一定循環(huán)數(shù)的 PCR(循環(huán)數(shù)與突變率的關(guān)系見下表),然后取 5 uL 電泳檢查。如果沒(méi)有優(yōu)化的 PCR 條件,一般可以先嘗試下面的 PCR 條件: PCR 前變性 94 3 分鐘易錯(cuò) PCR 94 1 分鐘 45 1 分鐘 循環(huán) 30 次(見注) 72 1 分鐘注:易錯(cuò) PCR 一般不需要熱啟動(dòng),也不需要在 PCR 結(jié)束后做延伸處理。
Prostaglandin F1β 1 mg     9。beta。,11。alpha。,15S-trihydroxy-prost-13E-en-1-oic acid; 9β-PGF1α|PGF1β; Prostaglandin F1β

3-CAF 10 mg     naphthalen-2-yl 1-2-fluorophenyl-1H-indazole-3-carboxylate

杜氏磷酸緩沖液(10LT     Dulbeccos PBS, Without calcium and magnesium.

HA-100 hydrochloride 50 mg     5-1-piperazinylsulfonyl-isoquinoline, dihydrochloride; C-1 HA-100 hydrochloride

Trichostatin A 10 mg     7-[4-dimethylaminophenyl]-N-hydroxy-4,6R-dimethyl-7-oxo-2E4E-heptadienamide; TSA; Trichostatin A

N-Phenyl-4-quinolin-2-ylmethylpiper-1-carboxamide     FAAH Inhibitor, PF-622
HDAC8 Fluorophore 1 ea     HDAC8 Fluorophore

*標(biāo)記二甲基化組蛋白H3K4多肽     Biotinylated Dimethyl Histone H3K4 Peptide 100 ul

thio-p-Toluamide 250 mg     4-methyl-benzenecarbothioamide; 4-thioamide thio-p-Toluamide

1,2-Dipalmitoyl-sn-glycero-O-ethyl-3-PC chloride 25 mg     1,2-Dipalmitoyl-sn-glycero-O-ethyl-3-Phosphocholine|1,2-EDPPC|DPePC; 4-ethoxy-N,N,N-trimethyl-10-oxo-7R-[1-oxohexadecyloxy]-4-oxide-3,5,9-trioxa-4-phosphapentacosan-1-aminium, monochloride

PB-22 N-5-hydroxypentyl metabolite 1 mg     quinolin-8-yl 1-5-hydroxypentyl-1H-indole-3-carboxylate; PB-22 N-5-hydroxypentyl metabolite

8-Iso methanamine -hydrochloride) (1 g)     8-Iso methanamine -hydrochloride), 8-Isomethanamine, dihydrochloride
enponete Buffer 5 ea     wo7ium enponete; enponete Buffer

Nε-     CML; N6-carboxymetxyl-L-lysine

綠色活細(xì)胞熒光探針Cytol Green     Cytol Green

I-BET762 1 mg     GSK525762A; S-2-6-4-chloropxenyl-8-metxoxy-4H-benzo[f][1,2,4]triazolo[4,3-a][1,4]diazepin-4-yl-N-etxylacetamide

2-Fluoropalmitic Acid 10 mg     2-fluorohexadecanoic acid 2-Fluoropalmitic Acid

((1S,2S,4R-4-4-(((S-2,3-dixy7H-inden-1-ylamino-7H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-7-yl-2-xy7noxycyclopentylmetxyl sulfamate     MLN-4924
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