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通用型全基因組擴(kuò)增試劑盒30 次保存

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更新時(shí)間:2017-07-17 13:53:29瀏覽次數(shù):195次

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通用型全基因組擴(kuò)增試劑盒30 次保存是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對(duì)功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機(jī)率引入隨機(jī)引入突變。

通用型全基因組擴(kuò)增試劑盒30 次保存產(chǎn)品及特點(diǎn):
易錯(cuò) PCRerror-prone PCR)是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對(duì)功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機(jī)率引入隨機(jī)引入突變。如果有適當(dāng)?shù)倪x擇方法,則可從構(gòu)建的突變庫(kù)選出所需突變體。易錯(cuò) PCR 和常規(guī) PCR 的比較如下:本產(chǎn)品就是專(zhuān)門(mén)為廣大的研究工作者進(jìn)行易錯(cuò) PCR 而開(kāi)發(fā),本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn):
1. 即開(kāi)即用,十分簡(jiǎn)單方便,尤其在生物制藥和酶學(xué)研究領(lǐng)域顯示出了它的*性。
2. 配方經(jīng)過(guò)精心優(yōu)化,突變率穩(wěn)定,突變沒(méi)有趨向性。易錯(cuò) PCR 的突變率為 0.66% ±0.13%),詳見(jiàn)使用手冊(cè)疑難解答。
3. 比體內(nèi)基因突變更快捷簡(jiǎn)單,但如果在 PCR 引物中設(shè)計(jì)位點(diǎn),則可使產(chǎn)物克隆到表達(dá)載體,也可以用于體內(nèi)蛋白活性的篩選。
4. 可用于連續(xù)易錯(cuò) PCRsequential error-prone PCR),只需把上一次易錯(cuò) PCR 的產(chǎn)物用作下一次易錯(cuò) PCR 的模板即可,使每一次獲得的小突變累積而產(chǎn)生重要的有益突變。
5. 只適用于擴(kuò)增 1kb 以下的產(chǎn)物,對(duì)于 1kb 以上的產(chǎn)物,建議分段擴(kuò)增。
通用型全基因組擴(kuò)增試劑盒30 次保存變性溫度與時(shí)間:
模板變性溫度是決定 PCR 反應(yīng)中雙鏈 DNA 解鏈的溫度,達(dá)不到變 性溫度就不會(huì)產(chǎn)生單鏈 DNA 模板,PCR 也就不會(huì)啟動(dòng)。變性溫度低則變性不*, DNA 雙鏈會(huì)很快復(fù)性,因而減少產(chǎn)量。變性溫度太高,又會(huì)影響酶的活性。一般情況 下可設(shè)為 94 20~30 秒,高溫時(shí)間應(yīng)盡量縮短,以保持耐熱 DNA 聚合酶的活力, 高變性溫度不宜超過(guò) 95 退火溫度與時(shí)間:退火溫度決定 PCR 特異性與產(chǎn)量。溫度高特異性強(qiáng),但過(guò)高則引物 不能與模板牢固結(jié)合.
通用型全基因組擴(kuò)增試劑盒30 次保存DNA 擴(kuò)增效率下降;
溫度低產(chǎn)量高,但過(guò)低可造成引物與模板 錯(cuò)配,非特異性產(chǎn)物增加。合適的退火溫度一般在 45~68之間。設(shè)置特定反應(yīng)的 適退火溫度,可根據(jù)引物的(G+C%含量進(jìn)行推測(cè),一般實(shí)驗(yàn)中退火溫度比擴(kuò)增引 物的熔解溫度 Tm 5,退火時(shí)間一般為 30~60 秒,足以使引物與模板之間*結(jié) 合,長(zhǎng)時(shí)間退火沒(méi)有必要。
通用型全基因組擴(kuò)增試劑盒30 次保存詳細(xì)說(shuō)明書(shū):

通用型全基因組擴(kuò)增試劑盒30 次保存使用方法:
1. 30 uL 的標(biāo)準(zhǔn) PCR 反應(yīng)體系為例,如果反應(yīng)體系不是 30 uL,各成分需要等按比例增加或減少。在一干凈的 PCR 管中,加入下列成分:易錯(cuò) PCR Mix, 10× 3 uL 易錯(cuò) PCR dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自備 DNA 模板(10ng/uL 1 uL PCR 引物(自備,10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶(5U/uL 1 -5 U 補(bǔ)水到 30 uL
2.
按已經(jīng)優(yōu)化的 PCR 條件進(jìn)行一定循環(huán)數(shù)的 PCR(循環(huán)數(shù)與突變率的關(guān)系見(jiàn)下表),然后取 5 uL 電泳檢查。如果沒(méi)有優(yōu)化的 PCR 條件,一般可以先嘗試下面的 PCR 條件: PCR 前變性 94 3 分鐘易錯(cuò) PCR 94 1 分鐘 45 1 分鐘 循環(huán) 30 次(見(jiàn)注) 72 1 分鐘注:易錯(cuò) PCR 一般不需要熱啟動(dòng),也不需要在 PCR 結(jié)束后做延伸處理。
23-dinor-6-keto Prostaglandin F1α sodium salt 100 ug     6-oxo-9。alpha。,11alpha。,15S-trihydroxy-2,3-dinor-prost-13E-en-1-oic acid, sodium salt; 23-dinor-6-keto PGF1α sodium salt); 2,3-dinor-6-keto Prostaglandin F1α sodium salt

Galangin 25 mg     3,5,7-Trihydroxyflavone|NSC 407229; 3,5,7-trihydroxy-2-phenyl-4H-1-benzopyran-4-one

*-EDTA溶液2.5%10X)(100ML     Trypsin-EDTA Solution 2.5% 10X), Contains 2.5% trypsin and 8.5 g/L sodium chloride. Porcine parvovirus and mycoplasma tested.

BX-795 50 mg     N-[3-[[5-iodo-4-[[3-[2-thienylcarbonylamino]propyl]amino]-2-pyrimidinyl]amino]phenyl]-1-pyrrolidinecarboxamide; BX-795

Hydroxymethyl Uracil 1 g     5-hydroxymethyl-2,41H,3H-pyrimidinedione Hydroxymethyl Uracil

Reprogramming Cocktail Set II 1000X     StemBoost Reprogramming Cocktail Set II 1000X), Sterile-Filtered
MPO Assay Buffer 1 ea     MPO Assay Buffer

Cambinol     Cambinol 5 mg

+-CP 47497 solution 25 mg     2[1R,3S-3-hydroxycyclohexyl]-5-2-methyloctan-2-ylphenol; +-CP 47,497 solution

17-trans Prostaglandin E3 25 ug     17-trans PGE3 9-oxo-11α,15S-dihydroxy-prosta-5Z,13E,17E-trien-1-oic acid

JWH 398 N-pentanoic acid metabolite-d5 1 mg     5-3-4-chloro-1-naphthoyl-1H-indol-1-yl-2,4,5,6,7-d5pentanoic acid; JWH 398 N-5-carboxypentyl metabolite-d5; JWH 398 N-pentanoic acid metabolite-d5

Prostaglandin D Synthase -hematopoietic-type; mouse recombinant) (50 ug)     Hematopoietic-PGDS|H-PGDS, Prostaglandin D Synthase -hematopoietic-type; mouse recombinant)
Precoated Mouse Anti-Rabbit IgG EIA 96-Well Solid Plate 5 ea     Precoated Mouse Anti-Rabbit IgG EIA 96-Well Solid Plate

Pyrimetxamine     Darapram|Daraprim|Khloridin|NSC 3061; 5,4-chloropxenyl-6-etxyl-2,4-pyrimidinediamine

ROS Brite HPF     ROS Brite HPF

Linezolid 10 mg     N-[[5S-3-[3-fluoro-4-4-morpholinylpxenyl]-2-oxo-5-oxazolidinyl]metxyl]-acetamide; PNU 100766|Zyvox ; Linezolid

Palmitoyl Ethanolamide 100 mg     N-2-xy7noxyetxyl-hexadec* PEA|Palmidrol; Palmitoyl Ethanolamide

4-Benzylpiperazin-1-yl)(2-isopentylaminopyridine-3-ylmetxanone     NSI-189
BBEAgar

梭菌強(qiáng)化培養(yǎng)基 厭氧菌的培養(yǎng)計(jì)數(shù),尤其是食品和臨床樣品中的梭菌 500g incubation media 梭菌強(qiáng)化培養(yǎng)基 厭氧菌的培養(yǎng)計(jì)數(shù),尤其是食品和臨床樣品中的梭菌 500g

蔥頭伯克氏菌 TF120復(fù)壯株,產(chǎn)堿性水溶性核甘類(lèi)抗生素。 /

0.500ml/瓶用于樣品的制備和稀釋

AntibioticAgar
菌種保存培養(yǎng)基250g用于常用細(xì)菌斜面?zhèn)鞔笆覝乇4?/span>

Plate count skim milk agar平板計(jì)數(shù)脫脂乳瓊脂 1.15338.0500 MERCK默克 incubation media Plate count skim milk agar平板計(jì)數(shù)脫脂乳瓊脂 1.15338.0500 MERCK默克

Skirrow瓊脂 250g 用于空腸彎曲菌的選擇分離培養(yǎng)(GBISO),每100mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基需添加2支配套試劑。(SR0330)

無(wú)血清培養(yǎng)基Serumfreemedium

緩沖動(dòng)力-鹽培
通用型全基因組擴(kuò)增試劑盒30 次保存V-P半固體瓊脂250g生化培養(yǎng)基,用于細(xì)菌V-P試驗(yàn)(SN標(biāo)準(zhǔn))

Actinomycetesculturemedium

茜素-β-半乳糖苷瓊脂 Aliz-gal Agar 250 用于食品、飲料和飲用水中大腸菌群快速檢測(cè)和計(jì)數(shù)(GB/T)

Miller培養(yǎng)基250g/瓶用于植物組織培養(yǎng)incubationmediaMiller培養(yǎng)基250g/瓶用于植物組織培養(yǎng)

100mlGN增菌液均質(zhì)袋 10個(gè)/ 用于志賀氏菌前增菌培養(yǎng)

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