即用型熒光定量 RT-PCR 試劑盒300 次運(yùn)輸詳細(xì)說明書：

即用型熒光定量 RT-PCR 試劑盒300 次運(yùn)輸產(chǎn)品及特點(diǎn)：
易錯(cuò) PCR（error-prone PCR）是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對功能的特性，在一定條件下（如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在）能夠按較高的機(jī)率引入隨機(jī)引入突變。如果有適當(dāng)?shù)倪x擇方法，則可從構(gòu)建的突變庫選出所需突變體。易錯(cuò) PCR 和常規(guī) PCR 的比較如下：本產(chǎn)品就是專門為廣大的研究工作者進(jìn)行易錯(cuò) PCR 而開發(fā)，本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn)：
1. 即開即用，十分簡單方便，尤其在生物制藥和酶學(xué)研究領(lǐng)域顯示出了它的*性。
2. 配方經(jīng)過精心優(yōu)化，突變率穩(wěn)定，突變沒有趨向性。易錯(cuò) PCR 的突變率為 0.66% （±0.13%），詳見使用手冊疑難解答。
3. 比體內(nèi)基因突變更快捷簡單，但如果在 PCR 引物中設(shè)計(jì)位點(diǎn)，則可使產(chǎn)物克隆到表達(dá)載體，也可以用于體內(nèi)蛋白活性的篩選。
4. 可用于連續(xù)易錯(cuò) PCR（sequential error-prone PCR），只需把上一次易錯(cuò) PCR 的產(chǎn)物用作下一次易錯(cuò) PCR 的模板即可，使每一次獲得的小突變累積而產(chǎn)生重要的有益突變。
5. 只適用于擴(kuò)增 1kb 以下的產(chǎn)物，對于 1kb 以上的產(chǎn)物，建議分段擴(kuò)增。
即用型熒光定量 RT-PCR 試劑盒300 次運(yùn)輸變性溫度與時(shí)間：
模板變性溫度是決定 PCR 反應(yīng)中雙鏈 DNA 解鏈的溫度，達(dá)不到變 性溫度就不會產(chǎn)生單鏈 DNA 模板，PCR 也就不會啟動。變性溫度低則變性不*， DNA 雙鏈會很快復(fù)性，因而減少產(chǎn)量。變性溫度太高，又會影響酶的活性。一般情況 下可設(shè)為 94℃ 20~30 秒，高溫時(shí)間應(yīng)盡量縮短，以保持耐熱 DNA 聚合酶的活力， 高變性溫度不宜超過 95℃。 退火溫度與時(shí)間：退火溫度決定 PCR 特異性與產(chǎn)量。溫度高特異性強(qiáng)，但過高則引物 不能與模板牢固結(jié)合.
即用型熒光定量 RT-PCR 試劑盒300 次運(yùn)輸DNA 擴(kuò)增效率下降；
溫度低產(chǎn)量高，但過低可造成引物與模板 錯(cuò)配，非特異性產(chǎn)物增加。合適的退火溫度一般在 45~68℃之間。設(shè)置特定反應(yīng)的 適退火溫度，可根據(jù)引物的（G+C）%含量進(jìn)行推測，一般實(shí)驗(yàn)中退火溫度比擴(kuò)增引 物的熔解溫度 Tm 低 5℃，退火時(shí)間一般為 30~60 秒，足以使引物與模板之間*結(jié) 合，長時(shí)間退火沒有必要。
即用型熒光定量 RT-PCR 試劑盒300 次運(yùn)輸使用方法：
1. 以 30 uL 的標(biāo)準(zhǔn) PCR 反應(yīng)體系為例，如果反應(yīng)體系不是 30 uL，各成分需要等按比例增加或減少。在一干凈的 PCR 管中，加入下列成分：易錯(cuò) PCR Mix, 10× 3 uL 易錯(cuò) PCR dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自備 DNA 模板（10ng/uL） 1 uL PCR 引物(自備，10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶（5U/uL） 1 -5 U 補(bǔ)水到 30 uL
2. 按已經(jīng)優(yōu)化的 PCR 條件進(jìn)行一定循環(huán)數(shù)的 PCR（循環(huán)數(shù)與突變率的關(guān)系見下表），然后取 5 uL 電泳檢查。如果沒有優(yōu)化的 PCR 條件，一般可以先嘗試下面的 PCR 條件： PCR 前變性 94℃ 3 分鐘易錯(cuò) PCR 94℃ 1 分鐘 45℃ 1 分鐘 循環(huán) 30 次（見注） 72℃ 1 分鐘注：易錯(cuò) PCR 一般不需要熱啟動，也不需要在 PCR 結(jié)束后做延伸處理。
Prostaglandin F1α Alcohol （50 mg）     1，9。alpha。，11。alpha。，15S-tetrahydroxy-prost-13E-ene； PGF1α Alcohol； Prostaglandin F1α Alcohol

Galangin （10 mg）     3,5,7-Trihydroxyflavone|NSC 407229； 3,5,7-trihydroxy-2-phenyl-4H-1-benzopyran-4-one

*-EDTA溶液0.5%（10X）（100ML）     Trypsin-EDTA Solution 0.5% （10X）， Contains 0.5% trypsin， 5.3mM EDTA ， and 8.5 g/L NaCl. No phenol red. Sterile filtered. Porcine parvovirus and mycoplasma tested.

BX-795 （5 mg）     N-[3-[[5-iodo-4-[[3-[（2-thienylcarbonyl）amino]propyl]amino]-2-pyrimidinyl]amino]phenyl]-1-pyrrolidinecarboxamide； BX-795

8-hydroxy-2’-deoxy Guanosine （5 mg）     2’-deoxy-8-hydroxy-guanosine； 8-OH-dG； 8-hydroxy-2’-deoxy Guanosine

Reprogramming Cocktail Set I （1000X）     StemBoost Reprogramming Cocktail Set I （1000X）， Sterile-Filtered
MPO DMSO （1 ml）     MPO DMSO

*標(biāo)記二甲基化組蛋白H3K36多肽     Biotinylated Dimethyl Histone H3K36 Peptide （200 ul）

（+）-CP 47，497 （solution） （10 mg）     2[（1R，3S）-3-hydroxycyclohexyl]-5-（2-methyloctan-2-yl）phenol； （+）-CP 47，497 （solution）

Ac-LETD-AFC （5 mg）     Caspase-8 Substrate （Fluorogenic）|N-Acetyl-Leu-Glu-Thr-Asp-7-amido-4-Trifluoromethylcoumarin； N-acetyl-L-leucyl-L-α-glutamyl-L-threonyl-N-[2-oxo-4-（trifluoromethyl）-2H-1-benzopyran-7-yl]-L-α-asparagine

JWH 398 N-（5-hydroxypentyl） metabolite-d5 （500 ug）     （4-chloronaphthalen-1-yl）（1-（5-hydroxypentyl）-1H-indol-3-yl-2，4，5，6，7-d5）methanone； JWH 398 N-（5-hydroxypentyl） metabolite-d5

Prostaglandin D Synthase -hematopoietic-type; mouse recombinant) (250 ug)     Hematopoietic-PGDS|H-PGDS, Prostaglandin D Synthase -hematopoietic-type; mouse recombinant)
Precoated （Mouse Anti-Rabbit IgG） EIA 96-Well Solid Plate （1 ea）     Precoated （Mouse Anti-Rabbit IgG） EIA 96-Well Solid Plate

Pyrimetxamine     Darapram|Daraprim|Khloridin|NSC 3061； 5,4-chloropxenyl-6-etxyl-2,4-pyrimidinediamine

ROS Brite APF     ROS Brite APF

Thromboxane B2 Luminex Standard （1 ea）     TXB2 Luminex Standard； Thromboxane B2 Luminex Standard

Palmitoyl Ethanolamide （10 mg）     N-（2-xy7noxyetxyl）-hexadec*； PEA|Palmidrol； Palmitoyl Ethanolamide

（4-Benzylpiperazin-1-yl）（2-（isopentylamino）pyridine-3-yl）metxanone     NSI-189
FuchsinBasicSodiumSulfiteAgar

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