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一步式 RT-PCR Mix 1mL保存

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更新時(shí)間:2017-07-17 13:50:43瀏覽次數(shù):97次

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一步式 RT-PCR Mix 1mL保存是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機(jī)率引入隨機(jī)引入突變。

一步式 RT-PCR Mix 1mL保存產(chǎn)品及特點(diǎn):
易錯(cuò) PCRerror-prone PCR)是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機(jī)率引入隨機(jī)引入突變。如果有適當(dāng)?shù)倪x擇方法,則可從構(gòu)建的突變庫選出所需突變體。易錯(cuò) PCR 和常規(guī) PCR 的比較如下:本產(chǎn)品就是專門為廣大的研究工作者進(jìn)行易錯(cuò) PCR 而開發(fā),本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn):
1. 即開即用,十分簡單方便,尤其在生物制藥和酶學(xué)研究領(lǐng)域顯示出了它的*性。
2. 配方經(jīng)過精心優(yōu)化,突變率穩(wěn)定,突變沒有趨向性。易錯(cuò) PCR 的突變率為 0.66% ±0.13%),詳見使用手冊疑難解答。
3. 比體內(nèi)基因突變更快捷簡單,但如果在 PCR 引物中設(shè)計(jì)位點(diǎn),則可使產(chǎn)物克隆到表達(dá)載體,也可以用于體內(nèi)蛋白活性的篩選。
4. 可用于連續(xù)易錯(cuò) PCRsequential error-prone PCR),只需把上一次易錯(cuò) PCR 的產(chǎn)物用作下一次易錯(cuò) PCR 的模板即可,使每一次獲得的小突變累積而產(chǎn)生重要的有益突變。
5. 只適用于擴(kuò)增 1kb 以下的產(chǎn)物,對于 1kb 以上的產(chǎn)物,建議分段擴(kuò)增。
一步式 RT-PCR Mix 1mL保存變性溫度與時(shí)間:
模板變性溫度是決定 PCR 反應(yīng)中雙鏈 DNA 解鏈的溫度,達(dá)不到變 性溫度就不會產(chǎn)生單鏈 DNA 模板,PCR 也就不會啟動(dòng)。變性溫度低則變性不*, DNA 雙鏈會很快復(fù)性,因而減少產(chǎn)量。變性溫度太高,又會影響酶的活性。一般情況 下可設(shè)為 94 20~30 秒,高溫時(shí)間應(yīng)盡量縮短,以保持耐熱 DNA 聚合酶的活力, 高變性溫度不宜超過 95。 退火溫度與時(shí)間:退火溫度決定 PCR 特異性與產(chǎn)量。溫度高特異性強(qiáng),但過高則引物 不能與模板牢固結(jié)合.
一步式 RT-PCR Mix 1mL保存DNA 擴(kuò)增效率下降;
溫度低產(chǎn)量高,但過低可造成引物與模板 錯(cuò)配,非特異性產(chǎn)物增加。合適的退火溫度一般在 45~68之間。設(shè)置特定反應(yīng)的 適退火溫度,可根據(jù)引物的(G+C%含量進(jìn)行推測,一般實(shí)驗(yàn)中退火溫度比擴(kuò)增引 物的熔解溫度 Tm 5,退火時(shí)間一般為 30~60 秒,足以使引物與模板之間*結(jié) 合,長時(shí)間退火沒有必要。
一步式 RT-PCR Mix 1mL保存詳細(xì)說明書:

一步式 RT-PCR Mix 1mL保存使用方法:
1. 30 uL 的標(biāo)準(zhǔn) PCR 反應(yīng)體系為例,如果反應(yīng)體系不是 30 uL,各成分需要等按比例增加或減少。在一干凈的 PCR 管中,加入下列成分:易錯(cuò) PCR Mix, 10× 3 uL 易錯(cuò) PCR dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自備 DNA 模板(10ng/uL 1 uL PCR 引物(自備,10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶(5U/uL 1 -5 U 補(bǔ)水到 30 uL
2.
按已經(jīng)優(yōu)化的 PCR 條件進(jìn)行一定循環(huán)數(shù)的 PCR(循環(huán)數(shù)與突變率的關(guān)系見下表),然后取 5 uL 電泳檢查。如果沒有優(yōu)化的 PCR 條件,一般可以先嘗試下面的 PCR 條件: PCR 前變性 94 3 分鐘易錯(cuò) PCR 94 1 分鐘 45 1 分鐘 循環(huán) 30 次(見注) 72 1 分鐘注:易錯(cuò) PCR 一般不需要熱啟動(dòng),也不需要在 PCR 結(jié)束后做延伸處理。
Prostaglandin F1α Alcohol 1 mg     1,9。alpha。,11。alpha。,15S-tetrahydroxy-prost-13E-ene; PGF1α Alcohol; Prostaglandin F1α Alcohol

OTX015 1 mg     HY-15743 6S-4-4-chlorophenyl-N-4-hydroxyphenyl-2,3,9-trimethyl-6H-thieno[3,2-f][1,2,4]triazolo[4,3-a][1,4]diazepine-6-acetamide

三羥基氨甲烷鹽酸鹽(100GM     TRIS Hydrochloride, 1185-53-1; MW 157.6

CUR 61414 5 mg     N-[3S,5S-1-1,3-benzodioxol-5-ylmethyl-5-1-piperazinylcarbonyl-3-pyrrolidinyl]-N-[3-methoxyphenylmethyl]-3,3-dimethyl-but*; G-856; CUR 61414

8-hydroxy-2-deoxy Guanosine 1 mg     2-deoxy-8-hydroxy-guanosine 8-OH-dG; 8-hydroxy-2-deoxy Guanosine

Hedgehog Hh Signaling Pathway Inhibitors Set     DiscoveryPak Hedgehog Hh Signaling Pathway Inhibitors Set
Methyltransferase Resorufin Buffer 10X 1 ea     MT Resorufin Buffer 10X); Methyltransferase Resorufin Buffer 10X

組蛋白H3多肽(安基酸:15-39     Histone H3 Peptide residues 15-39 200 ul

--CP 47,497 solution 10 mg     2[1S,3R-3-hydroxycyclohexyl]-5-2-methyloctan-2-ylphenol --CP 47,497 solution

Ac-VEID-AMC 5 mg     Caspase-6 Substrate Fluorogenic|N-Acetyl-Val-Glu-Ile-Asp-7-amido-4-Methylcoumarin; N-acetyl-L-valyl-L-α-glutamyl-L-isoleucyl-N-4-methyl-2-oxo-2H-1-benzopyran-7-yl-L-α-asparagine

JWH 203 N-pentanoic acid metabolite-d5 500 ug     5-3-2-2-chlorophenylacetyl-1H-indol-1-ylpentanoic acid-2,4,5,6,7-d5; JWH 203 N-pentanoic acid metabolite-d5

Fluprostenol serinol amide (50 mg)     Flu-SA, Fluprostenol serinol amide, N-[(2-hydroxy-1-hydroxymethyl)ethyl]-9α,11α,15R-trihydroxy-16-(3-trifluoromethyl)phenoxy)-17,18,19,2-tetranor-prosta-5Z,13E-dien-1-amide
Precoated Mouse Anti-Rabbit IgG EIA 96-Well Strip Plate 5 ea     Precoated Mouse Anti-Rabbit IgG EIA 96-Well Strip Plate

Danazol 500 mg     Danocrine|Ladogal|NSC 270916|WIN 17,757 pregna-2,4-dien-20-yno[2,3-d]isoxazol-17α-ol

SRB-VAD-FMK [Sulforhodamine B-VAD-FMK]     SRB-VAD-FMK [Sulforhodamine B-VAD-FMK]

Cell-Based Assay Neutrophil Isolation Histopaque 25 ml     Cell-Based Assay Neutrophil Isolation Histopaque

Decanoyl m-nitnoaniline 25 mg     N-3-nitnopxenyl-dec*; DemNA Decanoyl m-nitnoaniline

2-4-tert-Butylpxenyl-1H-benzimidazole, 2-[4-1,1-Dimetxyletxylpxenyl]-1H-benzimidazole     ZLN005
鹽蛋白胨水培養(yǎng)基250g用于化妝品中銅綠假單胞菌的檢測

酸性L-J培養(yǎng)基基礎(chǔ) 250(g) incubation media 酸性L-J培養(yǎng)基基礎(chǔ) 250(g)

氯化鎂孔雀綠肉湯 MM,RV Medium 250 沙門氏菌的選擇性增菌培養(yǎng)

煌綠黃胺嘧啶瓊脂250用于沙門氏菌的分離培養(yǎng)(Acumedia方法)incubationmedia煌綠黃胺嘧啶瓊脂250用于沙門氏菌的分離培養(yǎng)(Acumedia方法)

沙門氏菌A-F群診斷血清 1ml 用于沙門氏菌的血清學(xué)試驗(yàn)
BF839菌計(jì)數(shù)選擇培養(yǎng)基250g用于脆弱擬桿菌BF839固體平板計(jì)數(shù)

50061 BR 5kg incubation media 50061 BR 5kg

副溶血性弧菌 produces restriction endonuclease SnaBI 生產(chǎn)限制性核酸內(nèi)切酶SnaBI /

無菌病毒運(yùn)輸液(VTM)3ml/*36用于甲流病毒標(biāo)本運(yùn)送

30%葡萄糖溶液(PH6.5±0.5) 250g 用于嗜滲酵母檢驗(yàn)時(shí)的樣品稀釋(GB標(biāo)準(zhǔn))
一步式 RT-PCR Mix 1mL保存胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基28072250g用于普通的或營養(yǎng)要求較高的細(xì)菌的培養(yǎng),還用于醫(yī)藥工業(yè)潔凈室無菌程度的監(jiān)測及消毒劑消毒效果的...

Agar A 瓊脂A 100g incubation media Agar A 瓊脂A 100g

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