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雙酶一管式 RT-PCR 試劑盒 (MMLV-Taq)50 次運(yùn)輸

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更新時(shí)間:2017-07-17 13:49:47瀏覽次數(shù):79次

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雙酶一管式 RT-PCR 試劑盒 (MMLV-Taq)50 次運(yùn)輸是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對(duì)功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機(jī)率引入隨機(jī)引入突變。

雙酶一管式 RT-PCR 試劑盒 (MMLV-Taq)50 次運(yùn)輸使用方法:
1. 30 uL 的標(biāo)準(zhǔn) PCR 反應(yīng)體系為例,如果反應(yīng)體系不是 30 uL,各成分需要等按比例增加或減少。在一干凈的 PCR 管中,加入下列成分:易錯(cuò) PCR Mix, 10× 3 uL 易錯(cuò) PCR dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自備 DNA 模板(10ng/uL 1 uL PCR 引物(自備,10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶(5U/uL 1 -5 U 補(bǔ)水到 30 uL
2.
按已經(jīng)優(yōu)化的 PCR 條件進(jìn)行一定循環(huán)數(shù)的 PCR(循環(huán)數(shù)與突變率的關(guān)系見下表),然后取 5 uL 電泳檢查。如果沒有優(yōu)化的 PCR 條件,一般可以先嘗試下面的 PCR 條件: PCR 前變性 94 3 分鐘易錯(cuò) PCR 94 1 分鐘 45 1 分鐘 循環(huán) 30 次(見注) 72 1 分鐘注:易錯(cuò) PCR 一般不需要熱啟動(dòng),也不需要在 PCR 結(jié)束后做延伸處理。
雙酶一管式 RT-PCR 試劑盒 (MMLV-Taq)50 次運(yùn)輸產(chǎn)品及特點(diǎn):
易錯(cuò) PCRerror-prone PCR)是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對(duì)功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機(jī)率引入隨機(jī)引入突變。如果有適當(dāng)?shù)倪x擇方法,則可從構(gòu)建的突變庫(kù)選出所需突變體。易錯(cuò) PCR 和常規(guī) PCR 的比較如下:本產(chǎn)品就是專門為廣大的研究工作者進(jìn)行易錯(cuò) PCR 而開發(fā),本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn):
1. 即開即用,十分簡(jiǎn)單方便,尤其在生物制藥和酶學(xué)研究領(lǐng)域顯示出了它的*性。
2. 配方經(jīng)過(guò)精心優(yōu)化,突變率穩(wěn)定,突變沒有趨向性。易錯(cuò) PCR 的突變率為 0.66% ±0.13%),詳見使用手冊(cè)疑難解答。
3. 比體內(nèi)基因突變更快捷簡(jiǎn)單,但如果在 PCR 引物中設(shè)計(jì)位點(diǎn),則可使產(chǎn)物克隆到表達(dá)載體,也可以用于體內(nèi)蛋白活性的篩選。
4. 可用于連續(xù)易錯(cuò) PCRsequential error-prone PCR),只需把上一次易錯(cuò) PCR 的產(chǎn)物用作下一次易錯(cuò) PCR 的模板即可,使每一次獲得的小突變累積而產(chǎn)生重要的有益突變。
5. 只適用于擴(kuò)增 1kb 以下的產(chǎn)物,對(duì)于 1kb 以上的產(chǎn)物,建議分段擴(kuò)增。
雙酶一管式 RT-PCR 試劑盒 (MMLV-Taq)50 次運(yùn)輸DNA 擴(kuò)增效率下降;
溫度低產(chǎn)量高,但過(guò)低可造成引物與模板 錯(cuò)配,非特異性產(chǎn)物增加。合適的退火溫度一般在 45~68之間。設(shè)置特定反應(yīng)的 適退火溫度,可根據(jù)引物的(G+C%含量進(jìn)行推測(cè),一般實(shí)驗(yàn)中退火溫度比擴(kuò)增引 物的熔解溫度 Tm 5,退火時(shí)間一般為 30~60 秒,足以使引物與模板之間*結(jié) 合,長(zhǎng)時(shí)間退火沒有必要。
雙酶一管式 RT-PCR 試劑盒 (MMLV-Taq)50 次運(yùn)輸詳細(xì)說(shuō)明書:

Prostaglandin F1α 50 mg     9alpha。,11。alpha。,15S-trihydroxy-prost-13E-en-1-oic acid; PGF1α; Prostaglandin F1α

JNK Inhibitor VIII 5 mg     c-Jun N-terminal Kinase Inhibitor VIII; N-4-amino-5-cyano-6-ethoxy-2-pyridinyl-2,5-dimethoxy-benzeneacetamide

Tris堿(500GM     TRIS Base, 77-86-1; MW 121.13; Molecular Biology Grade

CUR 61414 10 mg     N-[3S,5S-1-13-benzodioxol-5-ylmethyl-5-1-piperazinylcarbonyl-3-pyrrolidinyl]-N-[3-methoxyphenylmethyl]-33-dimethyl-but*; G-856 CUR 61414

8-hydroxy Guanosine 5 mg     8-hydroxy-guanosine; 8-hydroxy Guanosine

Stem Cell Fate Regulator Set VII     DiscoveryPak Stem Cell Fate Regulator Set VII
Methyltransferase Resorufin Standard 1 ea     MT Resorufin Standard Methyltransferase Resorufin Standard

組蛋白H3多肽(安基酸:15-39     Histone H3 Peptide residues 15-39 100 ul

N-3-oxo-tetradec-7Z-enoyl-L-Homoserine lactone 5 mg     3-oxo-N-[3S-tetrahydro-2-oxo-3-furanyl]-7-tetradecenamide; 3-oxo-C14:1-Δ7cis-L-HSL; N-3-oxo-tetradec-7Z-enoyl-L-Homoserine lactone

Ac-VEID-AMC 10 mg     Caspase-6 Substrate Fluorogenic|N-Acetyl-Val-Glu-Ile-Asp-7-amido-4-Methylcoumarin; N-acetyl-L-valyl-L-α-glutamyl-L-isoleucyl-N-4-methyl-2-oxo-2H-1-benzopyran-7-yl-L-α-asparagine

JWH 203 N-pentanoic acid metabolite-d5 100 ug     5-3-2-2-chlorophenylacetyl-1H-indol-1-ylpentanoic acid-24,56,7-d5; JWH 203 N-pentanoic acid metabolite-d5

T4 DNA Ligase Buffer     T4 DNA Ligase Buffer
Precoated Mouse Anti-Rabbit IgG EIA 96-Well Strip Plate 1 ea     Precoated Mouse Anti-Rabbit IgG EIA 96-Well Strip Plate

Danazol 50 mg     Danocrine|Ladogal|NSC 270916|WIN 17,757 pregna-2,4-dien-20-yno[2,3-d]isoxazol-17α-ol

TF4-VAD-FMK     TF4-VAD-FMK

MitoXpress -Xtra 1 ea     MitoXpress -Xtra

Decanoyl m-nitnoaniline 10 mg     N-3-nitnopxenyl-dec*; DemNA; Decanoyl m-nitnoaniline

2-4-tert-Butylpxenyl-1H-benzimidazole 2-[4-1,1-Dimetxyletxylpxenyl]-1H-benzimidazole     ZLN005
鈉胰酪胨大豆肉湯250g用于*的MPN測(cè)定,增菌培養(yǎng)(GB標(biāo)準(zhǔn))

酸化K氏培養(yǎng)基 250g 用于果汁和濃縮果汁中環(huán)脂芽孢桿菌和其它的耐熱耐酸菌的檢測(cè)的。

胰胨大豆胨固綠瓊脂 Tryptic Soy Fast Green Agar 250 用于濾膜細(xì)菌總數(shù)的測(cè)定和分離培養(yǎng)(NEOGEN方法)

MS培養(yǎng)基250g/瓶含瓊脂,廣泛用于植物的器官、花藥、細(xì)胞和原生質(zhì)體的培養(yǎng)incubationmediaMS培養(yǎng)基250g/瓶含瓊脂,廣泛用于植物的器官、花藥、細(xì)胞和原生質(zhì)體的培養(yǎng)

3%堿性蛋白胨水
麥康凱肌醇阿東醇羧卞*瓊脂(MZAC)250g用于食品中克雷伯氏菌分離培養(yǎng)

大腸桿菌顯色培養(yǎng)基 用于大腸桿菌鑒定和計(jì)數(shù) 1000ml incubation media 大腸桿菌顯色培養(yǎng)基 用于大腸桿菌鑒定和計(jì)數(shù) 1000ml

抗輻射鏈霉菌 分離源:金針菇培養(yǎng)料。 /

無(wú)菌病毒運(yùn)輸液(VTM)3ml/*36用于甲流病毒標(biāo)本運(yùn)送

哥倫比亞瓊脂培養(yǎng)基(新藥典) 250g 用于梭菌的選擇性分離培養(yǎng)
雙酶一管式 RT-PCR 試劑盒 (MMLV-Taq)50 次運(yùn)輸芐*麥康凱配套試劑SR0520用于致病性嗜水氣單胞菌的選擇性分離培養(yǎng)(SN/T0750)

Agar B 瓊脂B 500g incubation media Agar B 瓊脂B 500g

五通橋毛霉 抗菌防腐劑檢測(cè),藥效試驗(yàn),質(zhì)量控制菌株,產(chǎn)生鼠李糖脂表面活性劑 /

ColiformMedium(Japan)

PentaneAmidine

雙酶一管式 RT-PCR 試劑盒 (MMLV-Taq)50 次運(yùn)輸變性溫度與時(shí)間:
模板變性溫度是決定 PCR 反應(yīng)中雙鏈 DNA 解鏈的溫度,達(dá)不到變 性溫度就不會(huì)產(chǎn)生單鏈 DNA 模板,PCR 也就不會(huì)啟動(dòng)。變性溫度低則變性不*, DNA 雙鏈會(huì)很快復(fù)性,因而減少產(chǎn)量。變性溫度太高,又會(huì)影響酶的活性。一般情況 下可設(shè)為 94 20~30 秒,高溫時(shí)間應(yīng)盡量縮短,以保持耐熱 DNA 聚合酶的活力, 高變性溫度不宜超過(guò) 95。 退火溫度與時(shí)間:退火溫度決定 PCR 特異性與產(chǎn)量。溫度高特異性強(qiáng),但過(guò)高則引物 不能與模板牢固結(jié)合

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