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兩管式 RT-PCR 試劑盒 (MMLV-Taq)50 次保存

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更新時(shí)間:2017-07-17 13:48:22瀏覽次數(shù):142次

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兩管式 RT-PCR 試劑盒 (MMLV-Taq)50 次保存是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對(duì)功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機(jī)率引入隨機(jī)引入突變。

兩管式 RT-PCR 試劑盒 (MMLV-Taq)50 次保存使用方法:
1. 30 uL 的標(biāo)準(zhǔn) PCR 反應(yīng)體系為例,如果反應(yīng)體系不是 30 uL,各成分需要等按比例增加或減少。在一干凈的 PCR 管中,加入下列成分:易錯(cuò) PCR Mix, 10× 3 uL 易錯(cuò) PCR dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自備 DNA 模板(10ng/uL 1 uL PCR 引物(自備,10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶(5U/uL 1 -5 U 補(bǔ)水到 30 uL
2.
按已經(jīng)優(yōu)化的 PCR 條件進(jìn)行一定循環(huán)數(shù)的 PCR(循環(huán)數(shù)與突變率的關(guān)系見下表),然后取 5 uL 電泳檢查。如果沒(méi)有優(yōu)化的 PCR 條件,一般可以先嘗試下面的 PCR 條件: PCR 前變性 94 3 分鐘易錯(cuò) PCR 94 1 分鐘 45 1 分鐘 循環(huán) 30 次(見注) 72 1 分鐘注:易錯(cuò) PCR 一般不需要熱啟動(dòng),也不需要在 PCR 結(jié)束后做延伸處理。
兩管式 RT-PCR 試劑盒 (MMLV-Taq)50 次保存產(chǎn)品及特點(diǎn):
易錯(cuò) PCRerror-prone PCR)是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對(duì)功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機(jī)率引入隨機(jī)引入突變。如果有適當(dāng)?shù)倪x擇方法,則可從構(gòu)建的突變庫(kù)選出所需突變體。易錯(cuò) PCR 和常規(guī) PCR 的比較如下:本產(chǎn)品就是專門為廣大的研究工作者進(jìn)行易錯(cuò) PCR 而開發(fā),本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn):
1. 即開即用,十分簡(jiǎn)單方便,尤其在生物制藥和酶學(xué)研究領(lǐng)域顯示出了它的*性。
2. 配方經(jīng)過(guò)精心優(yōu)化,突變率穩(wěn)定,突變沒(méi)有趨向性。易錯(cuò) PCR 的突變率為 0.66% ±0.13%),詳見使用手冊(cè)疑難解答。
3. 比體內(nèi)基因突變更快捷簡(jiǎn)單,但如果在 PCR 引物中設(shè)計(jì)位點(diǎn),則可使產(chǎn)物克隆到表達(dá)載體,也可以用于體內(nèi)蛋白活性的篩選。
4. 可用于連續(xù)易錯(cuò) PCRsequential error-prone PCR),只需把上一次易錯(cuò) PCR 的產(chǎn)物用作下一次易錯(cuò) PCR 的模板即可,使每一次獲得的小突變累積而產(chǎn)生重要的有益突變。
5. 只適用于擴(kuò)增 1kb 以下的產(chǎn)物,對(duì)于 1kb 以上的產(chǎn)物,建議分段擴(kuò)增。
兩管式 RT-PCR 試劑盒 (MMLV-Taq)50 次保存DNA 擴(kuò)增效率下降;
溫度低產(chǎn)量高,但過(guò)低可造成引物與模板 錯(cuò)配,非特異性產(chǎn)物增加。合適的退火溫度一般在 45~68之間。設(shè)置特定反應(yīng)的 適退火溫度,可根據(jù)引物的(G+C%含量進(jìn)行推測(cè),一般實(shí)驗(yàn)中退火溫度比擴(kuò)增引 物的熔解溫度 Tm 5,退火時(shí)間一般為 30~60 秒,足以使引物與模板之間*結(jié) 合,長(zhǎng)時(shí)間退火沒(méi)有必要。
兩管式 RT-PCR 試劑盒 (MMLV-Taq)50 次保存詳細(xì)說(shuō)明書:

Prostaglandin F1α 1 mg     9。alpha。,11alpha。,15S-trihydroxy-prost-13E-en-1-oic acid PGF1α; Prostaglandin F1α

SMAD3 Inhibitor, SIS3 500 ug     1-3,4-dihydro-6,7-dimethoxy-21H-isoinoneolinyl-3-1-methyl-2-phenyl-1H-pyrrolo[2,3-b]pyridin-3-yl-2-propen-1-one

*(5GM     Timentin 15:1 Ticarcillin Disodium Salt / potewwium Clavulanate Mixture

Vardenafil hydrochloride hydrate 100 mg     2-[2-ethoxy-5-[4-ethyl-1-piperazinylsulfonyl]phenyl]-5-methyl-7-propyl-imidazo[5,1-f][12,4]triazin-41H-one, monohydrochloride trihydrate Vardenafil hydrochloride hydrate

8-hydroxy Guanosine 1 mg     8-hydroxy-guanosine; 8-hydroxy Guanosine

JAK/STAT Signaling Inhibitor Panel, PathwayReady     PathwayReady JAK/STAT Signaling Inhibitor Panel
Methyltransferase Assay AdoHcy Positive Control 1 ea     MT Assay AdoHcy Positive Control; Methyltransferase Assay AdoHcy Positive Control

*標(biāo)記磷酸化組蛋白H3S10多肽     Biotinylated Phospho Histone Ser 10 Peptide 100 ul

N-3-oxo-tetradec-7Z-enoyl-L-Homoserine lactone 1 mg     3-oxo-N-[3S-tetrahydro-2-oxo-3-furanyl]-7-tetradecenamide; 3-oxo-C14:1-Δ7cis-L-HSL; N-3-oxo-tetradec-7Z-enoyl-L-Homoserine lactone

Ac-VDVAD-AFC 10 mg     Caspase-2 Substrate Fluorogenic|N-Acetyl-Val-Asp-Val-Ala-Asp-7-amido-4-Trifluoromethylcoumarin N-

JWH 203 N-5-hydroxypentyl metabolite-d5 100 ug     2-2-chlorophenyl-1-1-5-hydroxypentyl-1H-indol-3-ylethan-1-one-2,4,56,7-d5; JWH 203 N-5-hydroxypentyl metabolite-d5

17-phenyl trinor Prostaglandin F2α ethyl amide (5 mg)     .,15S-trihydroxy-17-phenyl-18,19,20-trinor-prosta-5Z,13E-dien-1-amide 17-phenyl trinor PGF2α ethyl amide|15(S)-Bimatoprost|Bimatoprost; 17-phenyl trinor Prostaglandin F2α ethyl amide
Mouse Monoclonal Anti-Rabbit IgG 500 dtn     Mouse Monoclonal Anti-Rabbit IgG

MTSSL 50 mg     2,5-dixy7no-2,2,5,5-tetrametxyl-3-[[metxylsulfonylthio]metxyl]-1H-pyrrol-1-yloxy

Z-IETD-ProRed 620     Z-IETD-ProRed 620

Ketorolac 1 g     5-benzoyl-2,3-dixy7H-pyrrolizine-1-carboxylic acid; Acular LS |Acular PF |RS 37619|Sprix Ketorolac

Heptadecanoyl Ethanolamide 100 mg     N-2-xy7noxyetxyl-heptadec*; Heptadecanoyl Ethanolamide

2E-3-6-Bromo-2-pyridinyl-2-cyano-N-[1S-1-pxenylethy]-2-propenamide     EZSolution WP1066
PALCAM瓊脂250g用于單增李氏菌選擇性分離(FDA標(biāo)準(zhǔn))

四環(huán)素檢定瓊脂 Tetracyline Examination Agar 用于四環(huán)素殘留的微生物學(xué)檢定(SN標(biāo)準(zhǔn))

聚山梨酯80培養(yǎng)基(真菌) Tween80 Medium(Fungi) 250 油劑的真菌無(wú)菌試驗(yàn)

MiddleBrook7H基礎(chǔ)250g/瓶用于分枝桿菌的分離培養(yǎng),每90ml培養(yǎng)基中添加0.5ml甘油和2ncubationmediaMiddleBrook7H基礎(chǔ)250g/瓶用于分枝桿菌的分離培養(yǎng),每90ml培養(yǎng)基中添加0.5
AeromonasMediumBase(Ryan)

50161 BR 10 incubation media 50161 BR 10

粉紅寄生菌 模式菌株??乖匦裕?/span>Type 3。質(zhì)量控制菌株 /

我妻氏*(9cm)用于神奈川現(xiàn)象試驗(yàn)

麥芽浸膏瓊脂 200g 用于霉菌和酵母菌的分離培養(yǎng)和計(jì)數(shù)
兩管式 RT-PCR 試劑盒 (MMLV-Taq)50 次保存Salicin

Agar for fungi acc.to KIMMIG( base) modified 真菌改性瓊脂(氯化) 1.05414.0500 MERCK默克 incubation media Agar for fungi acc.to KIMMIG( base) modified 真菌改性瓊脂(氯化) 1.05414.0500 MERCK默克

*麥康凱瓊脂基礎(chǔ)(SMAC) 250g 用于致病性大腸桿菌(包括O157H7)的分離培養(yǎng)(SN/T0973-2000SN/T 1827-2006

兩管式 RT-PCR 試劑盒 (MMLV-Taq)50 次保存變性溫度與時(shí)間:
模板變性溫度是決定 PCR 反應(yīng)中雙鏈 DNA 解鏈的溫度,達(dá)不到變 性溫度就不會(huì)產(chǎn)生單鏈 DNA 模板,PCR 也就不會(huì)啟動(dòng)。變性溫度低則變性不*, DNA 雙鏈會(huì)很快復(fù)性,因而減少產(chǎn)量。變性溫度太高,又會(huì)影響酶的活性。一般情況 下可設(shè)為 94 20~30 秒,高溫時(shí)間應(yīng)盡量縮短,以保持耐熱 DNA 聚合酶的活力, 高變性溫度不宜超過(guò) 95。 退火溫度與時(shí)間:退火溫度決定 PCR 特異性與產(chǎn)量。溫度高特異性強(qiáng),但過(guò)高則引物 不能與模板牢固結(jié)合

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