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PCR Mix 染料10mL保存

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更新時(shí)間:2017-07-17 13:18:03瀏覽次數(shù):170次

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PCR Mix 染料10mL保存是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機(jī)率引入隨機(jī)引入突變。

PCR Mix 染料10mL保存使用方法:
1. 30 uL 的標(biāo)準(zhǔn) PCR 反應(yīng)體系為例,如果反應(yīng)體系不是 30 uL,各成分需要等按比例增加或減少。在一干凈的 PCR 管中,加入下列成分:易錯(cuò) PCR Mix, 10× 3 uL 易錯(cuò) PCR dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自備 DNA 模板(10ng/uL 1 uL PCR 引物(自備,10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶(5U/uL 1 -5 U 補(bǔ)水到 30 uL
2.
按已經(jīng)優(yōu)化的 PCR 條件進(jìn)行一定循環(huán)數(shù)的 PCR(循環(huán)數(shù)與突變率的關(guān)系見下表),然后取 5 uL 電泳檢查。如果沒有優(yōu)化的 PCR 條件,一般可以先嘗試下面的 PCR 條件: PCR 前變性 94 3 分鐘易錯(cuò) PCR 94 1 分鐘 45 1 分鐘 循環(huán) 30 次(見注) 72 1 分鐘注:易錯(cuò) PCR 一般不需要熱啟動(dòng),也不需要在 PCR 結(jié)束后做延伸處理。
PCR Mix 染料10mL保存產(chǎn)品及特點(diǎn):
易錯(cuò) PCRerror-prone PCR)是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機(jī)率引入隨機(jī)引入突變。如果有適當(dāng)?shù)倪x擇方法,則可從構(gòu)建的突變庫選出所需突變體。易錯(cuò) PCR 和常規(guī) PCR 的比較如下:本產(chǎn)品就是專門為廣大的研究工作者進(jìn)行易錯(cuò) PCR 而開發(fā),本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn):
1. 即開即用,十分簡單方便,尤其在生物制藥和酶學(xué)研究領(lǐng)域顯示出了它的*性。
2. 配方經(jīng)過精心優(yōu)化,突變率穩(wěn)定,突變沒有趨向性。易錯(cuò) PCR 的突變率為 0.66% ±0.13%),詳見使用手冊疑難解答。
3. 比體內(nèi)基因突變更快捷簡單,但如果在 PCR 引物中設(shè)計(jì)位點(diǎn),則可使產(chǎn)物克隆到表達(dá)載體,也可以用于體內(nèi)蛋白活性的篩選。
4. 可用于連續(xù)易錯(cuò) PCRsequential error-prone PCR),只需把上一次易錯(cuò) PCR 的產(chǎn)物用作下一次易錯(cuò) PCR 的模板即可,使每一次獲得的小突變累積而產(chǎn)生重要的有益突變。
5. 只適用于擴(kuò)增 1kb 以下的產(chǎn)物,對于 1kb 以上的產(chǎn)物,建議分段擴(kuò)增。
PCR Mix 染料10mL保存DNA 擴(kuò)增效率下降;
溫度低產(chǎn)量高,但過低可造成引物與模板 錯(cuò)配,非特異性產(chǎn)物增加。合適的退火溫度一般在 45~68之間。設(shè)置特定反應(yīng)的 適退火溫度,可根據(jù)引物的(G+C%含量進(jìn)行推測,一般實(shí)驗(yàn)中退火溫度比擴(kuò)增引 物的熔解溫度 Tm 5,退火時(shí)間一般為 30~60 秒,足以使引物與模板之間*結(jié) 合,長時(shí)間退火沒有必要。
PCR Mix 染料10mL保存詳細(xì)說明書:

Sulprostone 1 mg     N-methylsulfonyl-9-oxo-11alpha。,15R-dihydroxy-16-phenoxy-1718,1920-tetranor-prosta-5Z,13E-dien-1-amide; Sulprostone

5-Cyano-2,3-di-p-tolyltetrazolium chloride 25 mg     CTC|Cyanotolyl Tetrazolium Chloride; 5-cyano-2,3-bis4-methylphenyl-2H-tetrazolium, monochloride

無水*(100GM     Sodium Phosphate, Dibasic Anhydrous ACS Grade; Cas 7558-79-4 Formula: Na2HPO4 Formula Weight: 141.96

MeOSuc-Ala-Ala-Pro-Val-AMC 1 mg     N-4-methoxy-1,4-dioxobutyl-L-alanyl-L-alanyl-L-prolyl-N-4-methyl-2-oxo-2H-1-benzopyran-7-yl-L-valinamide I 1270|MeOSuc-AAPV-AMC|Methoxy Succinyl-Ala-Ala-Pro-Val-AMC MeOSuc-Ala-Ala-Pro-Val-AMC

DAN-1 EE hydrochloride 50 mg     4-[[3-amino-2-naphthalenylamino]methyl]-benzoic acid, ethyl ester monohydrochloride; DAN-1 EE hydrochloride

4-1,13,3-Tetramethylbutylphenyl-polyethylene glycol t-Octylphenoxypolyethoxyethanol, Polyethylene glycol tert-octylphenyl ether     Triton X-100, MegaPure Detergent, 10% Solution
2-APB 1 g     2,2-diphenyl-1,3,2-oxaza-borolidine internal salt; 2-APB

Streptavidin:SureLight APC Protein Assay Format 1 mg     Streptavidin:SureLight APC Protein Assay Format

PP2 10 mg     3-4-chlorophenyl-1-1,1-dimethylethyl-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine; AGL 1879; PP2

Pyrazolam 1 mg     8-bromo-1-methyl-6-2-pyridinyl-4H-[1,2,4]triazolo[4,3-a][1,4]benzodiazepine

8-iso Prostaglandin E2 isopropyl ester 100 ug     9-oxo-11alpha。,15S-dihydroxy-8。beta。)-prosta-5Z13E-dien-1-oic acid, isopropyl ester; 8-iso PGE2 isopropyl ester 8-iso Prostaglandin E2 isopropyl ester

DiaEasy Dialyzer (3 ml) MWCO 12-14 kDa     DiaEasy Dialyzer (3 ml) MWCO 12-14 kDa
ω-3 Arachidonic Acid-d8 10 mg     8Z,11Z,14Z,17Z-eicosatetraenoic-89,11,12,1415,17,18-d8 acid ω-3 AA-d8; ω-3 Arachidonic Acid-d8

4-Chlorometxcathinone xy7nochloride 50 mg     4-CMC|Clephedrone 1-

鬼筆環(huán)肽-iFluor 780偶聯(lián)物     Phalloidin-iFluor 780 Conjugate

α-Linolenoyl Ethanolamide-d4 100 ug     N-2-xy7noxyetxyl-1,1’,2,2-d4-octadeca-9Z,12Z15Z-trienamide; α-Linolenoyl Ethanolamide-d4

N-Oleoyl Glycine 10 mg     N-9Z-octadecenoyl-glycine N-Oleoyl Glycine

Berbenine     Berbamine dixy7nochloride
LBSagar

沙門氏志賀氏增菌液 Salmonella Shigiella Enrichment 用于志賀氏菌和沙門氏菌增菌培養(yǎng)

豆蛋白質(zhì) Soy protein isolate 250 BR,90%

厭氧菌瓊脂250g/瓶用于厭氧菌的分離培養(yǎng)incubationmedia厭氧菌瓊脂250g/瓶用于厭氧菌的分離培養(yǎng)

VRB-MUG瓊脂 100g 用于大腸桿菌的固體平板檢測(GB標(biāo)準(zhǔn))
Mueller-HintonAgar

Candida selective agar acc.to NICKERSON 念珠菌選擇瓊脂 1.10456.0500 MERCK默克 incubation media Candida selective agar acc.to NICKERSON 念珠菌選擇瓊脂 1.10456.0500 MERCK默克

胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基 250g 可廣泛應(yīng)用于細(xì)菌的培養(yǎng),特別用于消毒劑消毒效果的測試、*的非選擇性增菌培養(yǎng)及蠟...

胎兒骨髓間質(zhì)干細(xì)胞成骨誘導(dǎo)分化
PCR Mix 染料10mL保存CCDABase

ATCC培養(yǎng)基:2693改良Dixon(mDixon) 250g 用于真菌培養(yǎng)

酸性肉湯 Acid Borth 250 用于酸性罐頭食品商業(yè)無菌檢驗(yàn)

Vogel-Johnson瓊脂基礎(chǔ)250g/瓶用于*選擇性分離,每培養(yǎng)基中添加0805incubationmediaVogel-Johnson瓊脂基礎(chǔ)250g/瓶用于*選擇性分離,每培養(yǎng)基中添加0805

三糖鐵管 5ml*20/ 用于腸桿菌科細(xì)菌的生化反應(yīng)篩選

PCR Mix 染料10mL保存變性溫度與時(shí)間:
模板變性溫度是決定 PCR 反應(yīng)中雙鏈 DNA 解鏈的溫度,達(dá)不到變 性溫度就不會(huì)產(chǎn)生單鏈 DNA 模板,PCR 也就不會(huì)啟動(dòng)。變性溫度低則變性不*, DNA 雙鏈會(huì)很快復(fù)性,因而減少產(chǎn)量。變性溫度太高,又會(huì)影響酶的活性。一般情況 下可設(shè)為 94 20~30 秒,高溫時(shí)間應(yīng)盡量縮短,以保持耐熱 DNA 聚合酶的活力, 高變性溫度不宜超過 95 退火溫度與時(shí)間:退火溫度決定 PCR 特異性與產(chǎn)量。溫度高特異性強(qiáng),但過高則引物 不能與模板牢固結(jié)合

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