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更新時間:2017-07-17 13:03:02瀏覽次數(shù):175次
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石蠟油,PCR 級10mL圖片詳細說明書:
石蠟油,PCR 級10mL圖片產(chǎn)品及特點:
易錯 PCR(error-prone PCR)是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機率引入隨機引入突變。如果有適當?shù)倪x擇方法,則可從構(gòu)建的突變庫選出所需突變體。易錯 PCR 和常規(guī) PCR 的比較如下:本產(chǎn)品就是專門為廣大的研究工作者進行易錯 PCR 而開發(fā),本產(chǎn)品具有下列特點:
1. 即開即用,十分簡單方便,尤其在生物制藥和酶學研究領(lǐng)域顯示出了它的*性。
2. 配方經(jīng)過精心優(yōu)化,突變率穩(wěn)定,突變沒有趨向性。易錯 PCR 的突變率為 0.66% (±0.13%),詳見使用手冊疑難解答。
3. 比體內(nèi)基因突變更快捷簡單,但如果在 PCR 引物中設(shè)計位點,則可使產(chǎn)物克隆到表達載體,也可以用于體內(nèi)蛋白活性的篩選。
4. 可用于連續(xù)易錯 PCR(sequential error-prone PCR),只需把上一次易錯 PCR 的產(chǎn)物用作下一次易錯 PCR 的模板即可,使每一次獲得的小突變累積而產(chǎn)生重要的有益突變。
5. 只適用于擴增 1kb 以下的產(chǎn)物,對于 1kb 以上的產(chǎn)物,建議分段擴增。
石蠟油,PCR 級10mL圖片變性溫度與時間:
模板變性溫度是決定 PCR 反應(yīng)中雙鏈 DNA 解鏈的溫度,達不到變 性溫度就不會產(chǎn)生單鏈 DNA 模板,PCR 也就不會啟動。變性溫度低則變性不*, DNA 雙鏈會很快復性,因而減少產(chǎn)量。變性溫度太高,又會影響酶的活性。一般情況 下可設(shè)為 94℃ 20~30 秒,高溫時間應(yīng)盡量縮短,以保持耐熱 DNA 聚合酶的活力, 高變性溫度不宜超過 95℃。 退火溫度與時間:退火溫度決定 PCR 特異性與產(chǎn)量。溫度高特異性強,但過高則引物 不能與模板牢固結(jié)合.
石蠟油,PCR 級10mL圖片DNA 擴增效率下降;
溫度低產(chǎn)量高,但過低可造成引物與模板 錯配,非特異性產(chǎn)物增加。合適的退火溫度一般在 45~68℃之間。設(shè)置特定反應(yīng)的 適退火溫度,可根據(jù)引物的(G+C)%含量進行推測,一般實驗中退火溫度比擴增引 物的熔解溫度 Tm 低 5℃,退火時間一般為 30~60 秒,足以使引物與模板之間*結(jié) 合,長時間退火沒有必要。
石蠟油,PCR 級10mL圖片使用方法:
1. 以 30 uL 的標準 PCR 反應(yīng)體系為例,如果反應(yīng)體系不是 30 uL,各成分需要等按比例增加或減少。在一干凈的 PCR 管中,加入下列成分:易錯 PCR Mix, 10× 3 uL 易錯 PCR dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自備 DNA 模板(10ng/uL) 1 uL PCR 引物(自備,10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶(5U/uL) 1 -5 U 補水到 30 uL
2. 按已經(jīng)優(yōu)化的 PCR 條件進行一定循環(huán)數(shù)的 PCR(循環(huán)數(shù)與突變率的關(guān)系見下表),然后取 5 uL 電泳檢查。如果沒有優(yōu)化的 PCR 條件,一般可以先嘗試下面的 PCR 條件: PCR 前變性 94℃ 3 分鐘易錯 PCR 94℃ 1 分鐘 45℃ 1 分鐘 循環(huán) 30 次(見注) 72℃ 1 分鐘注:易錯 PCR 一般不需要熱啟動,也不需要在 PCR 結(jié)束后做延伸處理。
13,14-dihydro-15-keto Prostaglandin E2 (50 mg) 9,15-dioxo-11。alpha。-hydroxy-prost-5Z-en-1-oic acid; 13,14-dihydro-15-keto PGE2; 13,14-dihydro-15-keto Prostaglandin E2
Desmethylene Paroxetine (hydrochloride) (50 mg) 4-[[(3S,4R)-4-(4-fluorophenyl)-3-piperidinyl]methoxy]-1,2-benzenediol, monohydrochloride
無水流鉀(100GM) potewwium Sulfate, Anhydrous, 777-80-5; Formula: K2SO4; FW: 174.26
4(Z),7(Z),10(Z),13(Z)-Hexadecatetraenoic Acid-d5 (50 ug) (4Z,7Z,10Z,13Z)-hexadeca-4,7,10,13-tetraenoic-15,15’,16,16,16-d5 acid; 4(Z),7(Z),10(Z),13(Z)-Hexadecatetraenoic Acid-d5
AAPH (10 g) 2,2’-azobis-2-methyl-propanimidamide, dihydrochloride; AAPH
7-((4-((3-ethynylphenyl)amino)-7-methoxyinoneazolin-6-yl)oxy)-N-hydroxyhept* CUDC-101
PtdIns-(4,5)-P2 (1,2-dioctanoyl) (sodium salt) (100 ug) 1-(1,2R-dioctanoylphosphatidyl)inositol-4,5-bisphosphate, trisodium salt; Phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate C-8|DOPI-4,5-P2; PtdIns-(4,5)-P2 (1,2-dioctanoyl) (sodium salt)
PTC-209 (1 mg) N-(2,6-dibromo-4-methoxyphenyl)-4-(2-methylimidazo[1,2-a]pyrimidin-3-yl)-2-thiazolamine
FKGK 11 (500 ug) 1,1,1,2,2-pentafluoro-7-phenyl-3-heptanone; FKGK 11
(S)-Dibutyl 3-Hydroxybutyl Phosphate (10 mg) (S)-TBP-OH; (S)-dibutyl (3-hydroxybutyl) phosphate
Chloramphenicol (100 g) 2,2-dichloro-N-[(1R,2R)-2-hydroxy-1-(hydroxymethyl)-2-(4-nitnophenyl)ethyl]-acetamide; CAF|CAM|CAP|NSC 3069; Chloramphenicol
DiaEasy Dialyzer (10 ml) MWCO 6-8 kDa DiaEasy Dialyzer (10 ml) MWCO 6-8 kDa
9-OxoODE (100 ug) 9-oxo-10E,12Z-octadecadienoic acid; 9-KODE; 9-OxoODE
CUDC-101 (10 mg) 7-[[4-[(3-ethynylpxenyl)amino]-7-metxoxy-6-inoneazolinyl]oxy]-N-xy7noxy-hept*
Rhod-FF, AM Rhod-FF, AM
Palmiaidic Acid (500 mg) (9E)-hexadecenoic acid; 9-trans-Hexadecenoic acid; Palmiaidic Acid
Dihomo-γ-Linolenoyl Ethanolamide (10 mg) N-(2-xy7noxyetxyl)-8Z,11Z,14Z-eicosatrienamide; Dihomo-γ-Linolenoyl Ethanolamide
Benzylpenicillin wo7ium salt Penicillin G wo7ium
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CLED培養(yǎng)基添加劑 CLED Medium Supplement 1毫升×5支 加入100mlC.L.E.D培養(yǎng)基中
萘啶酮酸4.5mg*5添加于225mlHB4成LBubationmedia萘啶酮酸4.5mg*5添加于225mlHB4成LB1
PeptoneSaltSolution
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