羥自由基檢測試劑盒500T售后服務(wù)使用注意事項
1．微量試劑取用前請離心集液。
2．7-AAD避光保存及使用。
3．7-AAD為潛在致癌物，操作時請采取防護措施，穿*、戴手套等。
4．本試劑盒適用于檢測活細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測時，細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105，，不*用于檢測組織樣本。
羥自由基檢測試劑盒500T售后服務(wù)操作方法
1．懸浮細(xì)胞離心（2000rpm離心5min）收集；貼壁細(xì)胞用*消化收集用PBS洗滌細(xì)胞二次（2000rpm離心5min）收集1~5×105細(xì)胞；
2．加入5μL 7-AAD染液，混勻；室溫、避光、反應(yīng)5～15min；
3．加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細(xì)胞；
4．請在1 hour內(nèi)，進(jìn)行下述熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀的觀察和檢測。
A．熒光顯微鏡觀察
1．滴一滴上述染色后的細(xì)胞懸液于載玻片上，并用蓋玻片蓋上細(xì)胞；
2．對于貼壁細(xì)胞來說，也可直接用蓋玻片來培養(yǎng)細(xì)胞并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；
（1）將細(xì)胞于蓋玻片上生長，用適當(dāng)?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，并設(shè)立陰性對照組；
（2）用PBS洗滌細(xì)胞兩次；
（3）在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液，混勻；
（4）將上述溶液滴加于蓋玻片表面，使長有細(xì)胞的蓋玻片表面均勻覆蓋；
（5）避光、室溫反應(yīng)5 min。
3．將蓋玻片倒置于載玻片上，于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長546nm，發(fā)射波長647 nm，7-AAD熒光信號呈紅色。
B．流式細(xì)胞儀分析
用流式細(xì)胞儀檢測，激發(fā)波長Ex=546 nm; 發(fā)射波長Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測。
羥自由基檢測試劑盒500T售后服務(wù)實驗步驟
貼壁細(xì)胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細(xì)胞。在消化時可加2％的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時，注意必須*清除EDTA：在標(biāo)記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌，清除EDTA，以免殘余的EDTA與Ca2＋螯合，影響Annexin V的結(jié)合。
（1）用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer；
（2）細(xì)胞收集。懸浮細(xì)胞收集：離心5分鐘；貼壁細(xì)胞：用不含EDTA的*消化收集后（注：*消化時間不宜過長，否則會影響細(xì)胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合），于室溫2000rpm離心5～10分鐘，收集細(xì)胞；
（3）細(xì)胞洗滌：用預(yù)冷1×PBS（4℃）重懸細(xì)胞一次，2000rpm離心5～10分鐘，洗滌細(xì)胞；
（4）加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細(xì)胞；
（5）Annexin V-FITC標(biāo)記：加入5μL的Annexin V-FITC混勻后，避光，室溫孵育15分鐘；
（6）PI標(biāo)記：上機前5分鐘再加入5μL的PI染色。
（7）上機前，補加200μL的1×Binding Buffer。
NCI-H838(人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

神經(jīng)元細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml)

RAMP3 Others Human 人 RAMP3 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

TF-1細(xì)胞，人血液白血病細(xì)胞 615小鼠狀肺腺癌瘤株,P615細(xì)胞 人少突膠質(zhì)前體細(xì)胞裂解物HOPCL

豬胚胎傳代細(xì)胞;ST

Caco-2(人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0030Bcap-37(人癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞;C3H 10T1/2 2A6
小梁網(wǎng)細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml)

FCGR1 Others Rat 大鼠 CD64 / FCGR1A 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

NIH?3T3? 小鼠成纖維細(xì)胞

非洲綠猴腎細(xì)胞;BS-C-1

Hela, 人細(xì)胞系

人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞;NCI-H209 大鼠肺大靜脈內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
CD48 Others Rat 大鼠 CD48 / SLAMF2 / BCM1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

人胚腎細(xì)胞;293 Cells, low passage

人支持細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL

EL4細(xì)胞，小鼠淋巴瘤細(xì)胞 3T3-Swiss albino(胚胎成纖維細(xì)胞) 人肺轉(zhuǎn)化細(xì)胞;AE1201

CXCL1 Protein Human 重組人 CXCL1 / MGSA / NAP-3 蛋白 (His & NusA 標(biāo)簽)

SCaBER(人膀胱鱗癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 人 FSH alpha / TSH alpha / CGA 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
大鼠糖原磷酸化酶同工酶BB(GP-BB)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

人外顯肽(extein)免疫試劑盒 Human extein ELISA Kit

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