當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>細(xì)胞氧化應(yīng)激>> *酯酶(ChE)檢測試劑盒100T實(shí)驗(yàn)方法
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更新時間:2017-07-07 12:44:12瀏覽次數(shù):159次
聯(lián)系我時,請告知來自 儀表網(wǎng)*酯酶(ChE)檢測試劑盒100T實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細(xì)胞懸液每50~100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進(jìn)行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對于懸浮細(xì)胞:
(1)取 10~60 萬細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細(xì)胞儀分析。
*酯酶(ChE)檢測試劑盒100T實(shí)驗(yàn)方法注意事項(xiàng)
(1)本試劑只適用于實(shí)驗(yàn),不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標(biāo)記時,盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4℃下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
(5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進(jìn)行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
NCI-H23(人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
小腸隱窩上皮細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
CD40LG Others Rat 大鼠 CD40L / CD154 / TNFSF5 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
MEG-01細(xì)胞,人成巨核細(xì)胞白血病細(xì)胞 正常小鼠Leydig細(xì)胞,TM3細(xì)胞 間充質(zhì)干細(xì)胞生長添加物MSCGS
EB病毒轉(zhuǎn)化的絨猴淋巴細(xì)胞;B95-8
BT-549(人管癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CM-M093小鼠胎兒真皮成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL 人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;LoVo
肝星形細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
FCGR2A Others Human 人 CD32a / FCGR2A 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
4T1 小鼠癌細(xì)胞
人APP-PS1雙基因轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞株;7WPS1
Hep-2, 人喉癌細(xì)胞系
人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞;NCI-H446 大鼠肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
BPIFB1 Others Human 人 BPIFB1 / LPLUNC1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
人胚腎上皮細(xì)胞系;KiMA
CL-0351Hep B1.2(人肝癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
SRS-82細(xì)胞,腹水瘤細(xì)胞 人白血病細(xì)胞,KG-1細(xì)胞 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KM932
蚊子幼蟲體細(xì)胞;Aedes albopictus clone C6/36
CST3 Others Human 人 CST3 / Cystatin-C / Cystatin-3 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
大鼠鐵調(diào)素(Hepc)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人微管蛋白,γ復(fù)合體關(guān)聯(lián)蛋白3(TUBGCP3)免疫試劑盒 Human Gamma-tubulin complex component 3,TUBGCP3 ELISA kit
可溶性淀粉合成酶(SSS)測試盒 紫外分光光度法 50管/48樣
RatReninELISA試劑盒大鼠腎素(Renin)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanInterleukin18,IL-18ELISA試劑盒人白介素18(IL-18)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Humanmucosaladdressincelladhesionmolecule-1,MAdCAM-1ELISAKit人黏膜地址素細(xì)胞黏附分子(MAdCAM-1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
兔子免疫球蛋白G(IgG)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Rat plaet activating factor (PAF) ELISA Kit 大鼠血小板活化因子(PAF)ELISA試劑盒
Humansolublevascularendothelialgrowthfactorreceptor-2,VEGFR-2/sFLK-1ELISAKit 人可溶性血管內(nèi)皮生長因子受體2(VEGFR-2/sFLK-1)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
HumanE2/ubiquitin-conjugatingenzyme,E2/UBCEELISA試劑盒人泛素結(jié)合酶(E2/UBCE)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
組織PAK2激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次
Humanpermeabilityglycoprotein,P-gpELISAKit人P糖蛋白/滲透性糖蛋白(P-gp)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
*酯酶(ChE)檢測試劑盒100T實(shí)驗(yàn)方法*(LH)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人促紅細(xì)胞生成素抗原(EPO-Ag)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人促紅細(xì)胞生成素抗體(EPO-Ab)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人雌E(ESTRONE)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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