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更新時間:2017-07-07 12:39:35瀏覽次數(shù):180次
聯(lián)系我時,請告知來自 儀表網脫氧核糖核酸(DNA)檢測試劑盒100T實驗方法實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細胞懸液每50~100 萬細胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應呈綠色熒光;而正常的細胞經JC-1 染色后應顯示紅色熒光。對于特定的細胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關文獻資料決定。
3、對于懸浮細胞:
(1)取 10~60 萬細胞,重懸于 0.5mL 細胞培養(yǎng)液中,細胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細胞。棄上清,注意盡量不要吸除細胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細胞儀分析。
脫氧核糖核酸(DNA)檢測試劑盒100T實驗方法注意事項
(1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質,在操作時請注意避光。在處理和標記時,盡可能在暗處進行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細胞標記后,在暗室內用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細胞,盡量在4℃下操作,以免影響細胞狀態(tài)。
(5)在細胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內進行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
MFC-GFP(小鼠前胃癌細胞(綠色熒光蛋白標記)) 5×106cells/瓶×2
人腦血管平滑肌細胞HBVSMC
DDR1 Others Rat 大鼠 DDR1 Kinase / MCK10 / CD167 人細胞裂解液 (陽性對照)
HEL細胞,人紅白細胞白血病細胞 小鼠腎集合管細胞(SV40轉化),M-1細胞 成纖維細胞培養(yǎng)基FM-acf
CM-H033人腸微血管內皮細胞*培養(yǎng)基100mL
B16(小鼠黑色素瘤細胞) 5×106cells/瓶×2 CM-R107大鼠海馬神經元細胞*培養(yǎng)基100mL EB病毒轉化的人B淋巴細胞;KMY0920
胰腺導管上皮細胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
FCGR3A Others Rat 大鼠 CD16a / FCGR3A 人細胞裂解液 (陽性對照)
MRC-5 人胚肺成纖維細胞
恒河猴肺細胞;RM-L1
SW 1990 [SW-1990, SW1990] , 人胰腺癌細胞
人前列腺癌細胞;LNCaP 大鼠肺大動脈平滑肌細胞*培養(yǎng)基 100mL
IL7R Others Rat 大鼠 IL7R / IL7RA 人細胞裂解液 (陽性對照)
人胚肺二倍體細胞;HEL-2
CM-H018人成纖維細胞*培養(yǎng)基100mL
HT-29細胞,人結腸腺癌細胞 人黑色素瘤細胞,HME7細胞 SV40T轉化人臍靜脈內皮細胞;PUMC-HUVEC-T1
H4-IIE(大鼠肝癌細胞 ) 5×106cells/瓶×2
CD86 Others Human 人 CD86 / B7-2 人細胞裂解液 (陽性對照)
大鼠晚期氧化蛋白產物(AOPP)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人維生素B1(VB1)免疫試劑盒 Human Vitamin B1,VB1 ELISA kit
血清總*(TC)含量測試盒 可見分光光度法 50管/48樣
RatProstaticAcidPhosphatase,PAPELISA試劑盒大鼠前列腺酸性磷酸酶(PAP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanInterferonαAntibody,IFNα-AbELISA試劑盒人抗α干擾素抗體(IFNα-Ab)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Humanmorbillivirus,MVELISAKit人麻疹病毒(MV)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
兔子葡萄糖氧化酶(GOD)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Rat thromboxane B2 (TXB2) ELISA Kit 大鼠血栓素B2(TXB2)ELISA試劑盒
Humanneutrophilelastase,NEELISAKit 人中性粒細胞彈性蛋白酶(NE)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
HumanDiphtheriaantibodyELISA試劑盒人白喉抗體(DiphtheriaAb)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
組織NADPH氧化酶活性比色法定量檢測試劑盒20/50次(10樣本)
Humanphosphoglyceratemutase2,PGAM2ELISAKit人磷酸甘油酸變位酶2(PGAM2)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
脫氧核糖核酸(DNA)檢測試劑盒100T實驗方法人的幽門螺桿菌IgG(HPIgG)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人的神經生長因子(NGF)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人的牛血清白蛋白殘留檢測ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人刀A(ConA)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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