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乙酰*檢測(cè)試劑盒-比色法100T實(shí)驗(yàn)方法

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乙酰*檢測(cè)試劑盒-比色法100T實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對(duì)于細(xì)胞懸液每50100 萬(wàn)細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 200×),按照每50μL JC-1200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽(yáng)性對(duì)照的設(shè)置:
    把試劑盒中提供的CCCP10mM )*按照1 1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進(jìn)行線粒體膜電位的檢測(cè)。對(duì)于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會(huì)*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對(duì)于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時(shí)間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對(duì)于懸浮細(xì)胞:
1)取 1060 萬(wàn)細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 孵育20 分鐘。
3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液()加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(),并放置于冰浴。
437孵育結(jié)束后,600g 4 離心3 4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
5)用JC-1 染色緩沖液()洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液()重懸細(xì)胞,600g 4 離心34 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液()重懸細(xì)胞,600g 4 離心 34 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
6)再用適量 JC-1 染色緩沖液()重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計(jì)檢測(cè)或流式細(xì)胞儀分析。
乙酰*檢測(cè)試劑盒-比色法100T實(shí)驗(yàn)方法注意事項(xiàng)
1)本試劑只適用于實(shí)驗(yàn),不適用于臨床檢測(cè);
2PIpropidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過(guò)皮膚吸收,對(duì)眼睛有刺激作用,使用時(shí)需戴手套;
3Annexin V-FITCPI是光敏物質(zhì),在操作時(shí)請(qǐng)注意避光。在處理和標(biāo)記時(shí),盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
4)整個(gè)操作過(guò)程動(dòng)作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請(qǐng)盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
6)為防止熒光衰變,宜在1小時(shí)內(nèi)進(jìn)行流式檢測(cè)。
7PI染色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)有可能造成檢測(cè)的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
hFOB 1.19(SV40轉(zhuǎn)染人成骨細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

前脂肪細(xì)胞培養(yǎng)基PAM

DPEP2 Others Human DPEP2 / MBD-2 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

HCC 94細(xì)胞,人子宮鱗癌細(xì)胞(高分化) 小鼠骨髓瘤細(xì)胞,Fox-NY細(xì)胞 人雪旺細(xì)胞HSC

CM-M020小鼠上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

hMo-PB single 人類外周血單核細(xì)胞團(tuán)塊單一來(lái)源,超純 > 1 mio.cells 人小腦顆粒細(xì)胞RNAHCGC miRNA5 μg
人絨毛膜間充質(zhì)基質(zhì)細(xì)胞HCMSC

FLRT2 Others Human FLRT2 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

HK-2 人腎近曲小管上皮細(xì)胞

CM-R027大鼠食管上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

HuH-7人肝癌細(xì)胞

EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMY1008 人神經(jīng)少突起前質(zhì)膠質(zhì)細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
NRN1L Others Human NRN1L / neuritin 1-like / Cpg15-2 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

人腦血管平滑肌細(xì)胞cDNAHBVSMC cDNA

小鼠肝癌瘤株;H22

GBC-SD細(xì)胞,人膽囊癌細(xì)胞 APP基因轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞株,7WD10細(xì)胞 中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞K1(亞系克隆);CHO-K1

Li-7(人肝癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

Promocell C-28019 MSC Growth Medium DXF, 間充質(zhì)干細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基DXF—無(wú)血清培養(yǎng)基 500ml
大鼠髓磷脂堿性蛋白(MBP)ELISA試劑盒 ,英文名: MBP ELISA Kit

人*(Pepsin)ELISA檢測(cè)試劑盒HumanPepsinELISAKit 96T/48T

鹿環(huán)磷酸鳥(niǎo)苷(cGMP)免疫試劑盒 Deer cyclic Guanosine monophosphate,cGMP ELISA Kit

CLIAKitforPRL(Rabbitprolactin)ELISAKit兔子催乳素規(guī)格:48T/96T

石蠟切片組織CYP1A2蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20

ELISAKitCALD人鈣調(diào)結(jié)合蛋白規(guī)格:48T/96T
兔子孕激素/孕酮(PROG)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Human fibromodulin (fibromodulin) ELISA Kit 人纖調(diào)蛋白(fibromodulin)ELISA試劑盒

humanImmunoglobulinE,IgEELISAKit *E(IgE)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HumancytokininMB,CKMBELISA試劑盒人激動(dòng)異構(gòu)酶/細(xì)胞分裂素MB(CKMB)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

組織HSV2(HERPESSIMPLX2)病毒定量PCR擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒20

HumanPlaetassociatedantibody,PA-IgMELISAKit人血小板相關(guān)抗體IgM(PA-IgM)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
乙酰*檢測(cè)試劑盒-比色法100T實(shí)驗(yàn)方法人骨形成蛋白(BMPs)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

人骨涎蛋白(BSP)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

人骨退化特異標(biāo)志物(CTX-2)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

人骨特異性堿性磷酸酶B(ALP-B)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

 

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