當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>細(xì)胞氧化應(yīng)激>> *-熒光法100T免費代測
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更新時間:2017-07-07 12:01:13瀏覽次數(shù):135次
聯(lián)系我時,請告知來自 儀表網(wǎng)*-熒光法100T免費代測實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細(xì)胞懸液每50~100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進(jìn)行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對于懸浮細(xì)胞:
(1)取 10~60 萬細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細(xì)胞儀分析。
*-熒光法100T免費代測注意事項
(1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標(biāo)記時,盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4℃下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
(5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進(jìn)行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
FO(小鼠骨髓瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
多聚賴氨酸 1 mg/mlPLL
DCBLD1 Others Human 人 Discoidin / DCBLD1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
Ovary細(xì)胞,人卵巢癌細(xì)胞 兔成骨C細(xì)胞,IF細(xì)胞 胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
CL-0036BRL-3A(大鼠正常肝細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
HRCEpC Pellet 人腎皮質(zhì)上皮細(xì)胞團(tuán)塊 > 1 mio.cells 人晶狀體上皮細(xì)胞cDNAHLEpiC cDNA
蚊源細(xì)胞
FUT8 Others Hamster 倉鼠 FUT8 (aa 68-575) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
原代滑膜皮細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基Many types of cells包裝:500/250/100
恒河猴肺細(xì)胞;RM-L1 人子細(xì)胞,HT-3細(xì)胞 SK-BR-3(腺癌細(xì)胞)
人骨肉瘤細(xì)胞;HOS
REG3G Others Human 人 REG3G / PAP1B 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
SIRP-BETA Others Mouse 小鼠 SIRPB1A / SIRP beta 1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
人男性正常細(xì)胞;Hs68
HCCLM3 人高轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞
AAV-293人胚腎細(xì)胞 Human embryonic kidney cell line AAV-293 DMEM+10%FBS
TNF Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 / 恒河猴 TNF-alpha / TNFA / TNFSF1A / Cachectin 蛋白
人臍帶靜脈平滑肌細(xì)胞 (HUVSMC)( 5×105 ) SKOV3/Taxol-25, 人卵巢癌*耐藥細(xì)胞株 Human
大鼠纖溶酶/纖維蛋白溶酶(PL/Fbn)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人胃泌素釋放肽前體(ProGRP)免疫試劑盒 Human pro-gastrin-releasing peptide,ProGRP ELISA Kit
檸檬酸合酶(CS)測試盒 可見分光光度法 10管/9樣
Ratplasminogenactivatorinhibitor1,PAI-1ELISA試劑盒大鼠纖溶酶原激活物抑制因子1(PAI-1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanInhibin,INHELISA試劑盒人抑制素(INH)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanMelatonin,MISAKit人褪黑素(MT)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
豚鼠白介素4(IL-4)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Human cytochrome P450c21A/21- hydroxylase (CYP21A) ELISA Kit 人細(xì)胞色素P450c21A/21-羥化酶(CYP21A)ELISA試劑盒
HumanMousemyeloperoxidase-antineutrophilcytoplasmicantibodyIgG,MPO-ANCAIgGELISAkit 人髓過氧化物酶特異性抗中性粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體IgG(MPO-ANCAIgG)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
HumancyclophilinB,CyPBELISA試劑盒人嗜環(huán)蛋白/親環(huán)素B(CyPB)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
組織HCK激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次
HumanPoliomyelitisVirus,PV-IgGELISAKit人抗副流感病毒IgG抗體(anti-PIVIgG)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
*-熒光法100T免費代測人基質(zhì)裂解蛋白(MAT)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子1(TIMP-1)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子4(TIMP-4)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子3(TIMP-3)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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