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更新時間:2017-07-07 12:00:56瀏覽次數(shù):197次
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磷脂酶D檢測試劑盒-比色法100T使用說明書實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細胞懸液每50~100 萬細胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應呈綠色熒光;而正常的細胞經(jīng)JC-1 染色后應顯示紅色熒光。對于特定的細胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻資料決定。
3、對于懸浮細胞:
(1)取 10~60 萬細胞,重懸于 0.5mL 細胞培養(yǎng)液中,細胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細胞。棄上清,注意盡量不要吸除細胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細胞儀分析。
磷脂酶D檢測試劑盒-比色法100T使用說明書注意事項
(1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標記時,盡可能在暗處進行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細胞標記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細胞,盡量在4℃下操作,以免影響細胞狀態(tài)。
(5)在細胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
EBTr (NBL-4) (牛胚氣管細胞) 5×106cells/瓶×2
肌細胞分離液MDS
GPNMB Others Human 人 GPNMB / Osteoactivin 人細胞裂解液 (陽性對照)
OVAC細胞,人卵巢癌細胞 猴腎C細胞,M145細胞 視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
CL-0044C2C12(小鼠成肌細胞)5×106cells/瓶×2
HREpC Pellet 人類腎小管上皮細胞團塊 > 1 mio.cells 人心肌細胞cDNAHCM cDNA
人胚胎肌肉組織來源細胞;CCC-HSM-2
FUT8 Others Human 人 FUT8 (aa 68-575) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)
VERO細胞衍生株;SVP
OS-RC-2細胞,腎癌細胞 小細胞肺癌,SH-77細胞 人腎癌Wilms細胞;G401
KM小鼠子瘤株;U14
ICOSLG Others Mouse 小鼠 B7-H2 / CD275 人細胞裂解液 (陽性對照)
CD68 Others Human 人 CD68 / Macrosialin / Gp110 (aa 1-319) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)
人耐VP16絨癌細胞株;JEG-3/VP16
CL-0461UACC-812(人導管瘤細胞)5×106cells/瓶×2
mOPC, 小鼠少突膠質(zhì)前體細胞 MSU-2細胞 QSG-7701(肝細胞)
人腎癌細胞;A498
IL22RA2 Others Human 人 IL22BP / IL22RA2 人細胞裂解液 (陽性對照)
小鼠肌球蛋白重鏈2(MYH2)ELISA試劑盒 ,英文名: MYH2 ELISA Kit
人胃泌素細胞抗體(GCA)ELISA檢測試劑盒Humangastrincellantibody,GCAELISAKit 96T/48T
大鼠細胞角蛋白18-M30(CK 18-M30)免疫試劑盒 Rat Cytokeratin 18-M30,CK 18-M30 ELISA kit
英文名稱RatCardiolipinIgA(ACAIgA))Elisakit大鼠心磷脂抗體CardiolipinIgA(ACAIgA)規(guī)格:96T/48T
過氧亞硝基陰離子解構(gòu)劑FeTMPyPpentachloride1毫升
ELISAKitPBP/CXCL7人血小板堿性蛋白規(guī)格:48T/96T
豚鼠白介素6(IL-6)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Rat angiotensinogen (aGT) ELISA Kit 大鼠血管緊張素原(aGT)ELISA試劑盒
HumanAnti-proteinase3antibodyIgG,PR3Ab-IgGELISAKit 人抗蛋白酶3抗體IgG(PR3Ab-IgG)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
HumancyclophilinA,CyPAELISA試劑盒人嗜環(huán)蛋白/親環(huán)素A(CyPA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
組織GSK3激酶總活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次
HumanPolyADPribosepolymerase,PARPELISAKit人多聚ADP核糖聚合酶(PARP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
磷脂酶D檢測試劑盒-比色法100T使用說明書人基質(zhì)細胞衍生因子1a(SDF-1a/CXCL12)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人基質(zhì)細胞衍生因子1(SDF-1)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人基質(zhì)裂解素(ST3)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人基質(zhì)裂解素(ST2)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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