當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>細(xì)胞凋亡檢測>> Camptothecin (5mM)400ul實(shí)驗(yàn)方法
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聯(lián)系我時(shí),請告知來自 儀表網(wǎng)procaspase-3激活劑200ul實(shí)驗(yàn)方法
Caspase 4抑制劑200ul實(shí)驗(yàn)方法
Camptothecin (5mM)400ul實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對(duì)于細(xì)胞懸液每50~100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對(duì)照的設(shè)置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進(jìn)行線粒體膜電位的檢測。對(duì)于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會(huì)*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對(duì)于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時(shí)間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對(duì)于懸浮細(xì)胞:
(1)取 10~60 萬細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計(jì)檢測或流式細(xì)胞儀分析。
Camptothecin (5mM)400ul實(shí)驗(yàn)方法注意事項(xiàng)
(1)本試劑只適用于實(shí)驗(yàn),不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對(duì)眼睛有刺激作用,使用時(shí)需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時(shí)請注意避光。在處理和標(biāo)記時(shí),盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個(gè)操作過程動(dòng)作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4℃下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
(5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時(shí)內(nèi)進(jìn)行流式檢測。
(7)PI染色時(shí)間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
C-33 A(人子細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
T-103AI型膠原酶(含10mL酶解緩沖液)1mL
HA Others H7N9 甲型流感 H7N9 (A/Anhui/1/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)
TU 686細(xì)胞,人喉癌細(xì)胞 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞,ECV-304細(xì)胞 中國倉鼠卵巢細(xì)胞-二氫*還原酶缺陷型;CHO/dhFr-
大鼠骨骼肌成肌細(xì)胞;L6
CNDP1 Others Human 人 CNDP1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)
小鼠子細(xì)胞;U14
IL18R1 Others Canine 狗 IL18R1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)
HEC-1A, 人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系
CEM細(xì)胞,白血病細(xì)胞 人前列腺癌細(xì)胞,PC-3M細(xì)胞 人肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞總RNAHIBEpiC tRNA
非洲綠猴腎細(xì)胞系/HCV-NS2;Vero-HCV-NS2
AHSG Others Human 人 Fetuin-A / AHSG / FETUA 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)
HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/chicken/ Yamaguchi/7/2004) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)
前列腺癌組織源性原代細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)/1ml
615小鼠T細(xì)胞性白血病瘤株;L7912
中國倉鼠卵巢細(xì)胞(亞系克隆);CHO Hu 164 SCF 17 腹水瘤細(xì)胞,SAC-IIC3細(xì)胞 EMT6細(xì)胞,小鼠細(xì)胞
人上皮細(xì)胞;MCF-10A
ACVR2A Others Mouse 小鼠 ACVR2A / ActrIIa 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)
大鼠組織因子途徑抑制物(TFPI)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人血清淀粉樣蛋白P(SAP)免疫試劑盒 Human SAP ELISA Kit
人抗肌動(dòng)蛋白抗體(AAA)ELISA試劑盒 ,英文名: AAA ELISA Kit
RatintactParathormone,i-PTHELISA試劑盒大鼠全段甲狀旁腺素(i-PTH)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Humangastricinhibitorypolypeptide,GIPELISA試劑盒人胃抑素(GIP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanInterleukin1,IL-1ELISAKit人白介素1(IL-1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
小鼠骨鈣素/骨谷酸蛋白(OT/BGP)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Rat terminal complement complex C5b-9 (TCC C5b-9) ELISA Kit 大鼠末端補(bǔ)體復(fù)合物C5b-9(TCC C5b-9)ELISA試劑盒
Humanthymusexpressedchemokine,TECKELISAKit 人胸腺表達(dá)趨化因子(TECK/CCL25)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
Humananti-ribosomalPproteinantibody,ARPA/Rib-PELISA試劑盒人抗核糖體P蛋白抗體(ARPA/Rib-P)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
植物細(xì)胞周期G0期同步(SYNCHRONY)處理試劑盒10次
HumantumormarkerDR-70forlungcancer,DR-70TMELISAKit人肺癌標(biāo)志物DR-70(DR-70TM)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Camptothecin (5mM)400ul實(shí)驗(yàn)方法小鼠α2抗纖溶酶(α2-AP)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
小鼠α1微球蛋白(α1-MG)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
小鼠α1酸性糖蛋白(α1-AGP)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
小鼠T細(xì)胞活化連接蛋白(LAT)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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