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更新時間:2017-07-06 08:46:09瀏覽次數(shù):232次
聯(lián)系我時,請告知來自 儀表網(wǎng)我司Annexin V-PE / 7-AAD 細(xì)胞凋亡檢測試劑盒100T免費代測本著標(biāo)準(zhǔn)*、質(zhì)量*、服務(wù)*、信譽(yù)*的宗旨,為客戶提供輕松便捷,安全可靠的網(wǎng)上采購模式!我們將竭誠為您服務(wù),咨詢!
Annexin V-PE / 7-AAD 細(xì)胞凋亡檢測試劑盒100T免費代測實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細(xì)胞懸液每50~100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進(jìn)行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對于懸浮細(xì)胞:
(1)取 10~60 萬細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細(xì)胞儀分析。
Annexin V-PE / 7-AAD 細(xì)胞凋亡檢測試劑盒100T免費代測注意事項
(1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標(biāo)記時,盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4℃下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
(5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進(jìn)行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
BEL-7404(人肝癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
CL-0085GBC-SD(人膽囊癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
CES1D Others Mouse 小鼠 CES3 / Carboxylesterase-3 / CES1D 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
Hela/DDP細(xì)胞,Hela細(xì)胞耐藥亞株 人急性T淋巴母細(xì)胞白血病細(xì)胞,MOLT-4細(xì)胞 小鼠肺腺癌低轉(zhuǎn)移細(xì)胞(VAP33-GFP融合蛋白穩(wěn)定過表達(dá));LA1-VAP33-GFP
中國倉鼠卵巢細(xì)胞;CHO
CTSC Others Human 人 CTSC / DPPI 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
CL-0300NCI-H661(人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
IL1R1 Others Mouse 小鼠 IL1R1 / CD121a 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
小鼠胰腺星狀細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
A9小鼠皮下結(jié)締組織細(xì)胞 A9 mice subcutaneous connective tissue cells DMEM培養(yǎng)基+10%FBS
IL1B Protein Rat 重組大鼠 IL-1 beta / IL1B 蛋白 (pro form, His 標(biāo)簽)
NEC(人食管癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 NIH/3T3(胚胎成纖維細(xì)胞)
MAG Others Human 人 MAG / GMA / Siglec-4 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
婆羅門牛皮膚成纖維樣細(xì)胞;BOS-3
膠原酶(含100mL酶解緩沖液) 10mL
AGS人胃腺癌細(xì)胞 AGS human gastric cancer cells F-12+10% FBS
IL21 Protein Human 重組人 Interleukin-21 / IL-21 蛋白
人齒根膜韌帶成纖維細(xì)胞(HPDLF)( 5×105 ) rEPC,大鼠內(nèi)皮祖細(xì)胞-骨髓 Rattus
大鼠血管緊張素Ⅰ轉(zhuǎn)化酶(ACE)ELISA試劑盒 ,英文名: ACE ELISA Kit
人血吸蟲(schistosoma)ELISA檢測試劑盒humanschistosomaELISAKit 96T/48T
大鼠CD63分子(CD63)免疫試劑盒 Rat Cluster of Differentiation 63,CD63 ELISA Kit
CLIAKitforsEPCRELISAKit大鼠可溶性血管內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體規(guī)格:48T/96T
*化學(xué)底物復(fù)合試劑盒5次
ELISAKitKLK11人*11規(guī)格:48T/96T
小鼠酶(CAT)ELISA 試劑盒 48T/96T 試劑盒 組裝/原裝
Rat immunoglobulin E (IgE) ELISA Kit 大鼠免疫球蛋白E(IgE)ELISA試劑盒
humanNoradrenaline,NAELISAKit 人*(NA)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
HumanAnti-phosphatidylserineantibody,APSAELISA試劑盒人抗磷脂酰*抗體(APSA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
植物細(xì)胞可溶性總核蛋白粗提制備試劑盒20次
HumantypeⅡcollagenhelicalpeptide,HELIX-ⅡELISAKit人Ⅱ型膠原螺旋肽(HELIX-Ⅱ)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Annexin V-PE / 7-AAD 細(xì)胞凋亡檢測試劑盒100T免費代測小鼠白三烯B4(LTB4)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
小鼠白介素9(IL-9)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
小鼠白介素8(IL-8/CXCL8)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
小鼠白介素7(IL-7)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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