當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>細胞生物學(xué)試劑>>細胞凋亡檢測>> Cycloheximide 2ml實驗方法
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更新時間:2017-07-05 12:28:44瀏覽次數(shù):163次
聯(lián)系我時,請告知來自 儀表網(wǎng)Cycloheximide 2ml實驗方法注意事項
(1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標記時,盡可能在暗處進行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細胞標記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細胞,盡量在4℃下操作,以免影響細胞狀態(tài)。
(5)在細胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
Cycloheximide 2ml實驗方法實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細胞懸液每50~100 萬細胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻資料決定。
3、對于懸浮細胞:
(1)取 10~60 萬細胞,重懸于 0.5mL 細胞培養(yǎng)液中,細胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細胞。棄上清,注意盡量不要吸除細胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細胞儀分析。
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CL-0237U251(人膠質(zhì)瘤細胞)5×106cells/瓶×2
TSPAN7 Others Cynomolgus 食蟹猴 TALLA-1 / TSPAN7 人細胞裂解液 (陽性對照)
MM96L細胞,黑色素瘤細胞 人急性成髓細胞白血病,Kasumi-1細胞 人導(dǎo)管瘤細胞;BT-474
非洲綠猴腎細胞系/HCV-E2;Vero-HCV-E2
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胎牛血清FBS
IL21R Others Rat 大鼠 IL-21R / Interleukin-21 Receptor 人細胞裂解液 (陽性對照)
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小鼠白三烯A4水解酶(LTA4H)ELISA試劑盒 ,英文名: LTA4H ELISA Kit
人血小板堿性蛋白(PBP/CXCL7)ELISA檢測試劑盒Humanplaetbasicprotein,PBPELISAKit 96T/48T
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英文名稱RatLHELISAKit大鼠促黃體激素(LH)規(guī)格:96T/48T
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ELISAKitEMA人上皮膜抗原規(guī)格:48T/96T
小鼠黃體生成素(LH)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Rat lymphocyte factor ELISA Kit 大鼠淋巴細胞因子ELISA試劑盒
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Humanantimousantibody,HAMAELISA人抗鼠抗體(HAMA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
植物羥賴氨酸(HYL)含量比色法定量檢測試劑盒20次
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Cycloheximide 2ml實驗方法小鼠干細胞因子/肥大細胞生長因子(SCF/MGF)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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