當前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>細胞生物學試劑>>細胞凋亡檢測>> TRAIL/Apo2L 100ul使用說明書
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更新時間:2017-07-05 12:27:49瀏覽次數(shù):271次
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TRAIL/Apo2L 100ul使用說明書實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細胞懸液每50~100 萬細胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應呈綠色熒光;而正常的細胞經(jīng)JC-1 染色后應顯示紅色熒光。對于特定的細胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻資料決定。
3、對于懸浮細胞:
(1)取 10~60 萬細胞,重懸于 0.5mL 細胞培養(yǎng)液中,細胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細胞。棄上清,注意盡量不要吸除細胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細胞儀分析。
TRAIL/Apo2L 100ul使用說明書注意事項
(1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標記時,盡可能在暗處進行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細胞標記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細胞,盡量在4℃下操作,以免影響細胞狀態(tài)。
(5)在細胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
95-D(人高轉(zhuǎn)移肺癌細胞) 5×106cells/瓶×2
CL-0254A-498(人腎癌細胞)5×106cells/瓶×2
CDCP1 Others Cynomolgus 食蟹猴 CDCP1 人細胞裂解液 (陽性對照)
A375細胞,惡性黑色素瘤細胞 人外周血嗜堿性白細胞,KU812細胞 人導管癌細胞;ZR-75-1
恒河猴腎細胞;RM-2
IL8 Others Human 人 IL-8 (aa 6-77) 人細胞裂解液 (陽性對照)
CL-0430RS1(大鼠皮膚成纖維樣細胞)5×106cells/瓶×2
IL22RA1 Others Canine 狗 IL22RA1 / IL22R 人細胞裂解液 (陽性對照)
人食道上皮細胞RNAHEEpiC miRNA5 μg
兔間變表皮鱗癌瘤株;VX2 前列腺癌細胞,22RV1細胞 MDCK superdome細胞,狗腎細胞隆突型
人永生化淋巴細胞;CNLMG-B5537LC
HA Others H3N2 甲型流感 H3N2 (A/Aichi/2/1968) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細胞裂解液 (陽性對照)
CD160 Others Cynomolgus 食蟹猴 CD160 人細胞裂解液 (陽性對照)
尿道上皮細胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
小鼠單核巨噬細胞;J774A.1
973細胞,人肺癌細胞 小鼠成骨細胞系,MC3T3-E1細胞 CL-0138Lec1(倉鼠卵巢細胞)5×106cells/瓶×2
THP-1(人髓系白血病單核細胞) 5×106cells/瓶×2
NHDF-c adult 正常人皮膚成纖維細胞(NHDF)來自成年捐獻者 500,000cells 成纖維細胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
鵝酶(CAT)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61)免疫試劑盒 Human plaet membrane glycoprotein ⅡbⅢa,GP-ⅡbⅢa ELISA Kit
人抗可提取核抗原抗體(ENA-Ab)ELISA試劑盒 ,英文名: ENA-Ab ELISA Kit
RatImmunoglobulinG,IgGELISA試劑盒大鼠免疫球蛋白G(IgG)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
humanfreechorionicgonadotropin,f-βhCGELISA試劑盒人游離β絨毛膜*(f-βhCG)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanintactParathormone,i-PTHELISAKit人全段甲狀旁腺素(i-PTH)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
小鼠活化蛋白C(APC)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Rat lymphocyte chemotactic factor (Lptn/LTN/XCL1) ELISA Kit 大鼠淋巴細胞趨化因子(Lptn/LTN/XCL1)ELISA試劑盒
humanfreechorionicgonadotropin,f-βhCGELISAKIT 人游離β絨毛膜*(f-βhCG)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
Humananti-Monocyteantibody,AMAELISA試劑盒人抗單核細胞抗體(AMA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
植物葡萄糖6-磷酸異構(gòu)酶(glucose-6-phosphateisomerase;GPI)電泳分析試劑盒5次
Humanurokinase,UKELISAKit人*(UK)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
TRAIL/Apo2L 100ul使用說明書小鼠高密度脂蛋白(HDL)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
小鼠高靈敏度促甲狀腺激素(U-TSH)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
小鼠肝脂酶(HL)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
小鼠肝炎病毒抗體(HV-Ab)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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