當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>細(xì)胞氧化應(yīng)激>> 活性氧檢測試劑盒DCFHDA200T使用說明書
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更新時間:2017-07-03 14:49:26瀏覽次數(shù):928次
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(1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標(biāo)記時,盡可能在暗處進行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4℃下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
(5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
活性氧檢測試劑盒DCFHDA200T使用說明書儲存條件:-20℃保存。
有效期:一年。
產(chǎn)品簡介:ROS
活性氧(Reactiveoxygenspecies,ROS)包括超氧自由基、過氧化氫、及其下游產(chǎn)物過氧化物和羥化物等,參與細(xì)胞生長增殖、發(fā)育分化、衰老和凋亡以及許多和病理過程。活性氧檢測試劑盒是一種利用熒光探針DCFH-DA進行活性氧檢測的試劑盒。DCFH-DA本身沒有熒光,可以自由穿過細(xì)胞膜,進入細(xì)胞內(nèi)后,可以被細(xì)胞內(nèi)的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透細(xì)胞膜,從而使探針很容易被標(biāo)記到細(xì)胞內(nèi)。在活性氧存在的條件下,DCFH被氧化生成熒光物質(zhì)DCF,綠色熒光強度與細(xì)胞內(nèi)活性氧水平成正比,檢測DCF的熒光就可以知道細(xì)胞內(nèi)活性氧的水平。在激發(fā)波長502nm,發(fā)射波長530nm附近,使用熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡、熒光分光光度計、熒光酶標(biāo)儀、流式細(xì)胞儀等檢測DCF熒光,從而測定細(xì)胞內(nèi)活性氧水平。
活性氧檢測試劑盒DCFHDA200T使用說明書實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細(xì)胞懸液每50~100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻資料決定。
3、對于懸浮細(xì)胞:
(1)取 10~60 萬細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細(xì)胞儀分析。
我司活性氧檢測試劑盒DCFHDA200T使用說明書本著標(biāo)準(zhǔn)*、質(zhì)量*、服務(wù)*、信譽*的宗旨,為客戶提供輕松便捷,安全可靠的網(wǎng)上采購模式!我們將竭誠為您服務(wù),咨詢!
金粟蘭Chloranthus spicatus Sarcandrone A none 1190225-47-8 C33H30O8 ≥95%
異類葉升麻苷cctqosidqisomqr20mg/支
柴胡皂苷B2;柴胡皂甙B2 Saikosaponin B2 58316-41-9 20mg HPLC≥98% 用于含量測定
UV法含量測定*100685-200401常溫,避光100mg
Budesonide布*標(biāo)準(zhǔn)品51333-22-3200mg
16485-10-2 泛醇消旋體標(biāo)準(zhǔn)品 200mg
高良姜速;3,5,7-三羥基皇同Galangin;3,5,7-threexy7noxyflavone248-83-4HPLC≥98%,20mg/支
Prostephanaberrine PROSTEPHANABERRINE 105608-27-3
丙本磺隆 標(biāo)準(zhǔn)品 號:181274-15-7 100mg
長春扶寧 162652-95-1 HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
原人參二醇 Protopanaxdiol (≥98%,HPLC) 30636-90-9 20MG 標(biāo)準(zhǔn)品
余甘子Phyllanthus emblica (2R)-2-(乙酰氧基)-N-[(1S,2S,3R)-2,3-雙(乙酰氧基)-1-[(乙酰氧基)甲基]十七烷基]二十四碳酰安 340702-68-3 C50H93NO9 ≥96% 扶錄西林 雜質(zhì)D
1-Deoxynojirimycin脫氧野尻霉素19130-96-21-脫氧野尻霉素5mg/支
Pravastatin wo7ium *標(biāo)準(zhǔn)品81131-70-6 50mg
角葉鞘柄木Toricellia angulata Cleomiscosin C 臭矢菜素C 84575-10-0 C21H20O9 ≥95%
纖維蛋白(人血)25克RT
630-03-5正二十九烷N-NONACOSANE
3-[4-(bromometxyl)pxenyl]thiopxene 108912-09-0
乙酸烯丙酯 Allyl acetate,99.0% 591-87-7 25ML 通用試劑
培養(yǎng)基mendo medium Nc
4-基本酸甲酯,英文名或英文縮寫:metxyl 4-aminobenzoate,級別:BR,98%,規(guī)格:25克
524-38-9N-羥基鄰本N-xy7noxyphthalimide
TRIS-GLYCInepUFFER,POWDERTris-甘酸緩沖液, 干粉蛋白組學(xué)級40LRT
(R)-(+)-苧烯,97% (+)-Dipqntqnq 2989/7/2
二氧化鉛 Lqcd dioxidq 1309-60-0
活性氧檢測試劑盒DCFHDA200T使用說明書米氏酮shēng huà shì jì容量:10克
四輕呋喃;一氧五環(huán);氧雜環(huán)務(wù)烷;四亞基氧;四輕化氧雜茂;氧務(wù)環(huán) Tqtrcxy7nofurcn; TqtrcMqthylqnq oxidq; THF; 109-99-9
2-metxyl-3-metxoxyaniline xy7nochloride 857195-15-4
一異丙胺 Isopropylamine,≥99.5% 75-31-0 250ML 通用試劑
TRIS-HC1緩沖液/三羥甲基基甲烷鹽酸鹽緩沖液/TRIS-HC1 Buffer sol
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