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一氧化氮檢測試劑盒50T實(shí)驗(yàn)方法

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更新時(shí)間:2017-07-03 14:48:48瀏覽次數(shù):113次

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一氧化氮檢測試劑盒50T實(shí)驗(yàn)方法儲(chǔ)存條件:2-8℃避光保存。

有效期:A B 3 個(gè)月,其余組分6 個(gè)月。

產(chǎn)品簡介:

一氧化氮(NitricOxideNO),是一種非常重要的性的細(xì)胞內(nèi)及細(xì)胞間的信號(hào)分子,在免疫、神經(jīng)及循環(huán)等系統(tǒng)中起著重要作用。一氧化氮化學(xué)性質(zhì)活潑,體內(nèi)代謝轉(zhuǎn)化為硝酸鹽(NO3-)和亞硝酸鹽(NO2-,此兩種濃度之和(NO3-NO2-)才能準(zhǔn)確代表NO水平。本法利用硝酸還原酶特異性將NO3-還原為NO2-,通過顯色反應(yīng)測定其濃度的高低。

一氧化氮檢測試劑盒50T實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細(xì)胞懸液每50100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 200×),按照每50μL JC-1200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置:
    把試劑盒中提供的CCCP10mM )*按照1 1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進(jìn)行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會(huì)*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時(shí)間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對于懸浮細(xì)胞:
1)取 1060 萬細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 孵育20 分鐘。
3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液()加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(),并放置于冰浴。
437孵育結(jié)束后,600g 4 離心3 4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
5)用JC-1 染色緩沖液()洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液()重懸細(xì)胞,600g 4 離心34 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液()重懸細(xì)胞,600g 4 離心 34 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
6)再用適量 JC-1 染色緩沖液()重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計(jì)檢測或流式細(xì)胞儀分析。
一氧化氮檢測試劑盒50T實(shí)驗(yàn)方法注意事項(xiàng)
1)本試劑只適用于實(shí)驗(yàn),不適用于臨床檢測;
2PIpropidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時(shí)需戴手套;
3Annexin V-FITCPI是光敏物質(zhì),在操作時(shí)請注意避光。在處理和標(biāo)記時(shí),盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
4)整個(gè)操作過程動(dòng)作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
6)為防止熒光衰變,宜在1小時(shí)內(nèi)進(jìn)行流式檢測。
7PI染色時(shí)間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
蘇木Caesalpinia sappan Sappanchalcone 蘇木查耳酮 94344-54-4 C16H14O5 98%

5-O-基維斯啊米醇苷Wqisscmiqof5-O-mqthylglycosidqsHPLC98%;20mg/

柴胡皂苷A;柴胡皂甙A Saikosaponin A 20736-09-8 20mg HPLC98% 用于含量測定

HPLC法含量測定*100684-200401常溫,避光100mg

Brinzolamide布林佐胺標(biāo)準(zhǔn)品138890-62-7200mg
164579-32-2 *鈉標(biāo)準(zhǔn)品(NA) 250mg

苦玄參苷ⅠAPicfeltarraeninAI28-48-3HPLC98%,20mg/

StilbosteMin B 2-甲基-5-(2-本基乙基)-1,3-本二酚 162411-67-8

Nonoxynol 10壬本醇醚10標(biāo)準(zhǔn)品27177-08-8 200mg壬本醇醚10標(biāo)準(zhǔn)品

巴卡亭III 27548-93-2 HPLC98%;20mg 訂購|咨詢
*相關(guān)化合物C標(biāo)準(zhǔn)品 20mg

余甘子Phyllanthus emblica beta-D-葡萄糖苷-3,4-二甲氧基本酯 84812-00-0 C14H20O8 97% 短桿菌素(T 000000

10-xy7noxycamptothecin10-*20mg/HPLC99%

Ergoloid Mesylates甲磺酸雙氫賣角堿標(biāo)準(zhǔn)品8067-24-1300mg甲磺酸雙氫賣角堿標(biāo)準(zhǔn)品

紫草素 517-89-5 HPLC98%;20mg 訂購|咨詢
纖維素薄膜shēng huà shì jì容量:保存:-201 O.D.

454-31-9二乙酯 97%etxyl difluoroacetate

6-Amino-5,6,7,8-tetraxy7no-2,3-nepxtxelenediol xy7nobromide 135

2,6--O-甲基-β-... 2,6-Di-O-methyl-β-cyclodextrin,98% 51166-71-3 1G 多肽試劑

2-基噻唑1公斤
4-基*shēng huà shì jì容量:保存:-20250毫克

9001-87-0磷脂酶DII(-20)EC 3.1.4.4 TYPE IV

3-Bromo-2-(4-isocyanatopxenyl)thiopxene 941716-97-8

丁酸異戊酯 Isoamyl butyrate,98% 106-27-4 100G 通用試劑

CAPS,wo7iumSALTCAPS, Na超純級白色至米白色粉末RTsigma
一氧化氮檢測試劑盒50T實(shí)驗(yàn)方法維生素E測試盒shēng huà shì jì容量:RT個(gè)

26873-85-8聚蔗糖400Polysucrose

2-氧代丁酸鈉,英文名或英文縮寫:wo7ium 2-oxobutyrate,級別:BR,97%,規(guī)格:25

伊紅美藍(lán)瓊脂 Eosin-Methylene Blue Agar (EMB) Null 250G 培養(yǎng)基

焦碳醋二酯 Diqthylpyroccronctq 1609-47-8

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