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AO/EB雙染試劑盒100T實(shí)驗(yàn)方法儲存條件：A液和B液-20℃避光保存。C液2-8℃保存。

有效期： 一年。

產(chǎn)品簡介：

AO/EB雙染細(xì)胞凋亡檢測試劑盒是采用DNA探針雙染細(xì)胞核的方法檢測細(xì)胞的狀態(tài)。吖啶橙（AO）具有膜通透性，能透過細(xì)胞膜，使核DNA和RNA染色。其激發(fā)波長為488nm，吸收波長為515nm。它與細(xì)胞中DNA和RNA結(jié)合量存在差別，復(fù)合物可發(fā)出不同顏色的熒光，紅色熒光為AO-DNA(F>600nm),綠色熒光為AO-RNA或單鏈DNA(F>530nm)。因此，在熒光顯微鏡下觀察，吖啶橙可透過正常細(xì)胞膜，使細(xì)胞核呈綠色或黃綠色均勻熒光；而在凋亡細(xì)胞中，因染色質(zhì)固縮或斷裂為大小不等的片斷，形成凋亡小體。吖啶橙使其染上致密濃染的黃綠色熒光，或黃綠色碎片顆粒；而壞死細(xì)胞黃熒光減弱甚至消失。吖啶橙AO常與溴化乙啶EB合用雙染，因EB只染死細(xì)胞使之產(chǎn)生桔黃色熒光，由此可區(qū)分出正常細(xì)胞、凋亡細(xì)胞及壞死細(xì)胞。

AO/EB雙染試劑盒100T實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)操作步驟：
1、液的配制：
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ，其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推；對于細(xì)胞懸液每50～100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 （200×），按照每50μL JC-1（200×）加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液（5 ×），混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置：
    把試劑盒中提供的CCCP（10mM ）*按照1 ∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中，稀釋至10uM ，處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ，進(jìn)行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細(xì)胞，通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失，JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光；而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細(xì)胞，CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同，需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對于懸浮細(xì)胞：
（1）取 10～60 萬細(xì)胞，重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中，細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
（2）加入 0.5mL JC-1 染色工作液，顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
（3）在孵育期間，按照每 1mL JC-1 染色緩沖液（5×）加入 4mL 蒸餾水的比例，配制適量的JC-1 染色緩沖液（1×），并放置于冰浴。
（4）37℃孵育結(jié)束后，600g 4 ℃離心3 ～4 分鐘，沉淀細(xì)胞。棄上清，注意盡量不要吸除細(xì)胞。
（5）用JC-1 染色緩沖液（1×）洗滌 2 次：加入 1mL JC-1 染色緩沖液（1×）重懸細(xì)胞，600g 4 ℃離心3～4 分鐘，沉淀細(xì)胞，棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液（1×）重懸細(xì)胞，600g 4 ℃離心 3～4 分鐘，沉淀細(xì)胞，棄上清。
（6）再用適量 JC-1 染色緩沖液（1×）重懸后，用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察，也可以用熒光分光光度計(jì)檢測或流式細(xì)胞儀分析。
AO/EB雙染試劑盒100T實(shí)驗(yàn)方法注意事項(xiàng)
（1）本試劑只適用于實(shí)驗(yàn)，不適用于臨床檢測；
（2）PI（propidium iodide，碘化丙錠）有毒性，能通過皮膚吸收，對眼睛有刺激作用，使用時需戴手套；
（3）Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì)，在操作時請注意避光。在處理和標(biāo)記時，盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段，用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后，在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察；
（4）整個操作過程動作要盡量輕柔，勿用力吹打細(xì)胞，盡量在4℃下操作，以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
（5）在細(xì)胞洗滌的后一步，請盡量將上清棄凈，以免PBS殘留，有可能會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
（6）為防止熒光衰變，宜在1小時內(nèi)進(jìn)行流式檢測。
（7）PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高，建議首*行Annexin V-FITC染色，短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
云南百部Stemona mairei Neostenine 新斯替寧堿 477953-07-4 C17H27NO2 ≥95%

知母皂苷ETimoscponinq20mg

赤靈芝Ganoderma lucidum 3,5,9-Trixy7noxyergosta-7,22-dien-6-one 3,5,9-三輕基賣角甾-7,22-二烯-6-同 88191-14-4 C28H44O4 單元素鈦溶液成分分析標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)08058

HPLC法含量測定倍他環(huán)糊精100317-200902常溫，避光100mg

非索非那定相關(guān)物質(zhì)C標(biāo)準(zhǔn)品15mg
1，3-丙二醇 1,3- propyleneglycol 100mg

各塞定NetworkSaiding10046-37-110mg

6-O-trans-p-CouMaroylshanzhiside metxyl ester 6-O-反式對香豆酰三梔苷甲酯 1246012-26-9

Cefotiam xy7nochloride*標(biāo)準(zhǔn)品66309-69-1325mg*標(biāo)準(zhǔn)品

羌活醇;Notopterol 88206-46-6 20mg 訂購|咨詢
103765-01-1 *雜質(zhì)D標(biāo)準(zhǔn)品 10mg

紫葉小檗 Berberisthunbergiicv.atropurpurea 流酸小蘗減 633-66-9 C40H42N2O15S ≥98% 芹菜鎮(zhèn)定素19110

迷菊酯標(biāo)準(zhǔn)品 乙呋草黃標(biāo)準(zhǔn)品 滅線靈標(biāo)準(zhǔn)品

Gemcitabine xy7nochloride *標(biāo)準(zhǔn)品122111-03-9 200mg

蒲公英甾醇乙酸酯 6426-43-3 HPLC≥98%;10mg 訂購|咨詢
8（S）-HETrE （25 ug）     8S-xy7noxy-9E，11Z，14Z-eicosatrienoic acid； 8（S）-HETrE

（S）-Ketoprofen （5 g）     （S）-2-（3-benzoylpxenyl）Propionic Acid|Dexketoprofen； （S）-3-benzoyl-α-metxyl-benzeneacetic acid

iFluor 405-標(biāo)記鏈霉親和素偶聯(lián)物 1 mg/ml     iFluor 405-streptavidin conjugate 1 mg/ml

α-Piperidinobutiopxenone （xy7nochloride） （50 mg）     1-pxenyl-2-（1-piperidinyl）-1-butenone， monoxy7nochloride； α-Piperidinobutiopxenone （xy7nochloride）

Docosatrienoic Acid （25 mg）     13Z，16Z，19Z-docosatrienoic acid； Docosatrienoic Acid

α-Carboxybenzylpenicillin diwo7ium salt     Carbenicillin diwo7ium
Glycoprotein IIb Fragment (300-312)Gly-Asp-Gly-Arg-His-Asp-Leu-Leu-Val-Gly-Ala-Pro-Leu

α-Casomorphin (1-2)Tyr-Pro

[Lys8,Lys9]-Neurotensin (8-13)Lys-Lys-Pro-Tyr-Ile-Leu

Biotin-Glucagon (1-29), bovine, human, porcinepiotin-His-Ser-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Ser-Arg-Arg-Ala-Gln-Asp-Phe-Val-Gln-Trp-Leu-Met-Asn-Thr

OV-2, SheepLeu-Arg-Arg-Ile-Ile-Arg-Lys-Ile-Ile-His-Ile-Ile-Lys-Lys-NH2
AO/EB雙染試劑盒100T實(shí)驗(yàn)方法1,2-丙二醇1,2-PropanediolAR500mL

CA1131-5g吖啶橙10127-02-35g0

1721666-1MGStreptavidin 鏈親合素9013-20-11mg

Swab DNA Kit100T

L-Alanine100g