Thymidine5ml實(shí)驗(yàn)方法使用注意事項(xiàng)

1．微量試劑取用前請(qǐng)離心集液。
2．7-AAD避光保存及使用。
3．7-AAD為潛在致癌物，操作時(shí)請(qǐng)采取防護(hù)措施，穿*、戴手套等。
4．本試劑盒適用于檢測(cè)活細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)，細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105，，不*用于檢測(cè)組織樣本。

產(chǎn)品名稱：Thymidine5ml實(shí)驗(yàn)方法

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

胸苷是一種嘧啶脫氧核糖核苷酸，經(jīng)過(guò)連續(xù)的磷酸化形成可用于合成DNA脫氧胸腺嘧啶核苷三磷酸。

Thymidine是采用優(yōu)質(zhì)試劑原料配置，用于生物學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)。

Thymidine5ml實(shí)驗(yàn)方法操作方法
1．懸浮細(xì)胞離心（2000rpm離心5min）收集；貼壁細(xì)胞用*消化收集用PBS洗滌細(xì)胞二次（2000rpm離心5min）收集1~5×105細(xì)胞；
2．加入5μL 7-AAD染液，混勻；室溫、避光、反應(yīng)5～15min；
3．加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細(xì)胞；
4．請(qǐng)?jiān)?/span>1 hour內(nèi)，進(jìn)行下述熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀的觀察和檢測(cè)。
A．熒光顯微鏡觀察
1．滴一滴上述染色后的細(xì)胞懸液于載玻片上，并用蓋玻片蓋上細(xì)胞；
2．對(duì)于貼壁細(xì)胞來(lái)說(shuō)，也可直接用蓋玻片來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；
（1）將細(xì)胞于蓋玻片上生長(zhǎng)，用適當(dāng)?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，并設(shè)立陰性對(duì)照組；
（2）用PBS洗滌細(xì)胞兩次；
（3）在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液，混勻；
（4）將上述溶液滴加于蓋玻片表面，使長(zhǎng)有細(xì)胞的蓋玻片表面均勻覆蓋；
（5）避光、室溫反應(yīng)5 min。
3．將蓋玻片倒置于載玻片上，于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長(zhǎng)546nm，發(fā)射波長(zhǎng)647 nm，7-AAD熒光信號(hào)呈紅色。
B．流式細(xì)胞儀分析
用流式細(xì)胞儀檢測(cè)，激發(fā)波長(zhǎng)Ex=546 nm; 發(fā)射波長(zhǎng)Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測(cè)。
Thymidine5ml實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)步驟
貼壁細(xì)胞需用0.25%的*消化。注意過(guò)度消化可損傷細(xì)胞。在消化時(shí)可加2％的BSA可防止消化過(guò)度。如果用含EDTA的*消化時(shí)，注意必須*清除EDTA：在標(biāo)記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌，清除EDTA，以免殘余的EDTA與Ca2＋螯合，影響Annexin V的結(jié)合。
（1）用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer；
（2）細(xì)胞收集。懸浮細(xì)胞收集：離心5分鐘；貼壁細(xì)胞：用不含EDTA的*消化收集后（注：*消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，否則會(huì)影響細(xì)胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合），于室溫2000rpm離心5～10分鐘，收集細(xì)胞；
（3）細(xì)胞洗滌：用預(yù)冷1×PBS（4℃）重懸細(xì)胞一次，2000rpm離心5～10分鐘，洗滌細(xì)胞；
（4）加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細(xì)胞；
（5）Annexin V-FITC標(biāo)記：加入5μL的Annexin V-FITC混勻后，避光，室溫孵育15分鐘；
（6）PI標(biāo)記：上機(jī)前5分鐘再加入5μL的PI染色。
（7）上機(jī)前，補(bǔ)加200μL的1×Binding Buffer。
蓮 Nelumbo nucifera Gaertn Neferine 甲基蓮心堿 2292-16-2 C38H44N2O6 ≥98%

紫蘇醇PerillaAlcohol236-29-420mg

金銀忍冬Lonicera maackii 2,3,2",3"-Tetraxy7noochnaflavone 2,3,2",3"-四輕金連木黃同 678138-59-5 C30H22O10 膽石酸(100127

含量測(cè)定*100305-201003常溫，避光100mg

nitnofurazone *標(biāo)準(zhǔn)品59-87-0 200mg
(+)-兒 (+)-Catechin hydrate (≥98%,HPLC) 225937-10-0 20MG 標(biāo)準(zhǔn)品

土瓜狼毒Euphorbia prolifera 黏黴同 508-09-8 C30H48O ≥95% 訶子酸0 85

對(duì)照品*100350-200501HPLC法含量測(cè)定

Perpxen*標(biāo)準(zhǔn)品58-39-9 200mg*標(biāo)準(zhǔn)品

苦參Sophra　flavescens　Ait Caulophylline N-甲基野靛堿 486-86-2 C12H16N2O ≥98%
66258-76-2 *標(biāo)準(zhǔn)品 350mg

棕矢車菊速JaceosidinHPLC≥98%,20mg/支;

Polygonal (3R,4AS,8AS)-3-輕基-5,5,8A-*基-3,4,4A,6,7,8-六輕奈-2-甲全 72537-20-3

 te (AS)碳酸標(biāo)準(zhǔn)品546-93-0 2g碳酸標(biāo)準(zhǔn)品

低聚果糖-蔗果三糖;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證 470-69-9 20mg 訂購(gòu)|咨詢
Lyso-PAF C-16-d4 （100 ug）     1-O-hexadecyl-（7，7，8，8-d4）-sn-glyceryl-3-phosphorylcholine； Lyso-Plaet-activating Factor C-16-d4； Lyso-PAF C-16-d4

UNC3230 （1 mg）     5-[（cyclohexylcarbonyl）amino]-2-（pxenylamino）-4-thiazolecarboxamide

RPE-標(biāo)記鏈霉親和素偶聯(lián)物 1 mg/ml     RPE-streptavidin conjugate 1 mg/ml

CAY10679 （10 mg）     1，1’-（1，8-dioxo-1，8-octanediyl）bis[glycyl-glycine； N，N’-bis（glycyl-glycine）-hexane-1，6-Dicarboxyamide； CAY10679

Linoleic Acid （1 g）     9Z，12Z-octadecadienoic acid； fairic Acid； Linoleic Acid

2-4（4-metxylpxenyl）-1，2-benzisothiazol-3（2H）-one     Jumonji HDM Inhibitor， PBIT
Gliadin (43-49)(Gliadorphin) AlphaTyr-Pro-Gln-Pro-Gln-Pro-Phe

W-K-Y-M-V-M-NH2Trp-Lys-Tyr-Met-Val-Met-NH2

[Leu144, Arg147]-PLP (139-151), [L144, R147-PLP(139-151)]His-Ser-Leu-Gly-Lys-Leu-Leu-Gly-Arg-Pro-Asp-Lys-Phe

Biotin-[Gln1]-Gastrin I (human)Biotin-Gln-Gly-Pro-Trp-Leu-Glu-Glu-Glu-Glu-Glu-Ala-Tyr-Gly-Trp-Met-Asp-Phe-NH2

Obestatin, rat, mousePhe-Asn-Ala-Pro-Phe-Asp-Val-Gly-Ile-Lys-Leu-Ser-Gly-Ala-Gln-Tyr-Gln-Gln-His-Gly-Arg-Ala-Leu-NH2
Thymidine5ml實(shí)驗(yàn)方法二正丙胺DipropylamineCP250mL

CA1371-5g牛血清白蛋白(全組分)9048-46-85g0

ER0711Van91 I400 units

Plasmid Maxi Kit10T

Inositol100