實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)品名稱：番茄內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)Apx基因PCR試劑盒
貨號:CP96883
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品運輸：低溫運輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
運輸：低溫
注意事項：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

PCR檢測方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
(2)待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
其中所述參照基因為本領(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。
步驟(2)為：待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中所述待測目的基因為本領(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
使用方法:
一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。
1. 標(biāo)記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，*用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8. 如果有 N 個樣品，則需要進行 N+2 個樣品提取，多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。
三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20μL 體系，在樣品制備室進行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+9 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），6 個用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+4 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），1 個用于PCR 陽性對照。

以下是番茄內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)Apx基因PCR試劑盒公司正在熱銷的產(chǎn)品：
Chicken Estrogen ELISA Kit資源名稱光滑假絲酵母種屬:Candida glabrata提供形式:凍干粉

Chicken FT3(Free Triiodothyronine) ELISA Kit資源名稱Solobacteriummoorei種屬:Solobacteriummoorei分離基物:人類糞便，日本

Chicken FT4(Free Thyroxine) ELISA Kit資源名稱斯氏泛菌種屬:Pantoea stewartii subsp. stewartii提供形式:凍干粉

Chicken CCK(Cholecystokinin) ELISA Kit資源名稱產(chǎn)色葡萄球菌種屬:Staphylococcuschromogenes分離基物:豬皮

Chicken OVA(Ovalbumin) ELISA Kit資源名稱吸水鏈霉菌吸水亞種種屬:Streptomyces hygroscopicus subsp. hygroscopicus分離基物:復(fù)活島土壤

Chicken Calprotectin ELISA Kit資源名稱熱紫鏈霉菌安全等級:1模式菌株:no

Chicken IL-12 p70(Interleukin 12 p70) ELISA Kit資源名稱巴氏生孢八疊球菌種屬:Sporosarcina pasteurii安全等級:1

Chicken CCL5(C-C motif chemokine 5) ELISA Kit資源名稱大腸桿菌BS-3234種屬:E. coli S17-1 lpir Stab模式菌株:未知

Chicken GPX1(Glutathione peroxidase) ELISA Kit資源名稱膿腫分枝桿菌種屬:Mycobacterium abscessus提供形式:凍干物

Chicken T3(Triiodothyronine) ELISA Kit資源名稱弗勞地檸檬酸桿菌種屬:Citrobacter freundii提供形式:凍干物

Chicken P8(caspase 8) ELISA Kit資源名稱普通擬桿菌種屬:Bacteroides│vulgatus提供形式:凍干物

Chicken SOD1(Superoxide dismutase [Cu-Zn]) ELISA Kit資源名稱嗜熱棲熱菌種屬:Thermus│thermophilus分離基物:熱溫泉

Chicken DHT(Dihydrotestosterone) ELISA Kit資源名稱高加索酸奶乳桿菌種屬:Lactobacillus kefiri分離基物:口服液

Chicken OCLN(Occludin) ELISA Kit資源名稱水生異常球菌種屬:Deinococcus│aquaticus分離基物:環(huán)境污水

Chicken IL-1A(Interleukin 1 Alpha) ELISA Kit資源名稱毛霉屬（斜面）種屬:Mucor sp.分離基物:白酒糟

Chicken PRL(Prolactin) ELISA Kit資源名稱殺鮭氣單胞菌種屬:Aeromonas salmonicida分離基物:化工污水

Chicken GH(Growth Hormone) ELISA Kit資源名稱梭形芽孢桿菌種屬:Bacillus fusiformis提供形式:凍干物

Camel IFN-γ(Interferon Gamma) ELISA Kit資源名稱致瀉大腸埃希氏菌種屬:Escherichia coli EPEC O 127 : K63提供形式:凍干物

Camel IL-10(Interleukin 10) ELISA Kit資源名稱微桿菌屬種屬:Microbacterium sp.形態(tài)菌落形態(tài)：菌落淺黃色，圓形，表面光滑、濕潤、稍凸，不透明。

Camel PGC(Pepsinogen) ELISA Kit資源名稱暗色環(huán)紋炭團菌（斜面）種屬:Annulohypoxylon stygium提供形式:試管斜面
番茄內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)Apx基因PCR試劑盒SCT|Secretin營養(yǎng)瓊脂(NA)三層無菌包裝即用平板PRODUCTNAME：NUTRIENTAGARPLATES【產(chǎn)品用途】營養(yǎng)瓊脂(NA)三層無菌包裝即用平板用于空間環(huán)境中浮游菌及沉降菌等微生物的測定以及實驗室相關(guān)微生物指標(biāo)的測定。

G14 Gastrin 6|G17 Gastrin 14|G34 Gastrin|G52 Big gastrin|G6|GAS|GAST|gastrin|Gastrin 17|Gastrin 34|Gastrin component I Gastrin 52|Gastrin component II|Gastrin component III營養(yǎng)瓊脂(NA)接觸皿PRODUCTNAME：NUTRIENTAGARCONTACTPLATES【產(chǎn)品用途】營養(yǎng)瓊脂(NA)接觸皿用于設(shè)備、車間、人員、包裝材料等表面微生物的測定。

BMP-7(Bone Morphogenetic Protein 7)||BMP7|OP1|Osteogenic Protein-1R2A瓊脂培養(yǎng)基（三層無菌包裝）成品培養(yǎng)基PRODUCTNAME：R2AAgar【R2A瓊脂培養(yǎng)基產(chǎn)品用途】R2A瓊脂培養(yǎng)基用于水中細(xì)菌總數(shù)的測定。

Angiotensin IIBaird-Parker瓊脂平板用途：Baird-Parker瓊脂平板用于凝固酶陽性葡萄球菌的選擇性分離培養(yǎng)和計數(shù)。（美國FDA、ISO、EP、USP）。規(guī)格：20個/盒。儲存條件：2-8℃，避光保存

ADH|VP|AVP血平板用途：血平板用于營養(yǎng)要求較高的細(xì)菌的培養(yǎng)及溶血試驗。（GB、ISO）。規(guī)格：20個/盒。儲存條件：2℃-8℃，避光保存

Activin binding protein|follistatin|FS|FST麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板用途：麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板用于分離發(fā)酵乳糖和非發(fā)酵乳糖的革蘭氏陰性腸道桿菌。（GB）規(guī)格：20個/盒。儲存條件：2-8℃，避光保存

MPO(Myeloperoxidase)孟加拉紅瓊脂平板（虎紅瓊脂平板）用途：孟加拉紅瓊脂平板（虎紅瓊脂平板）供霉菌和酵母菌的計數(shù)、分離培養(yǎng)用。規(guī)格：20個/盒。儲存條件：2℃-8℃，避光保存

MMP-13(Matrix Metalloproteinase 13)|MMP-13|CLG3|MANDP1|Collagenase 3SS瓊脂培養(yǎng)基平板用途：SS瓊脂培養(yǎng)基平板用于沙門氏菌、志賀氏菌的選擇性分離培養(yǎng)。（GB）。規(guī)格：20個/盒。儲存條件：2℃-8℃，避光保存