使用方法:
一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，*用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 陽(yáng)性對(duì)照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產(chǎn)品跟市場(chǎng)上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8. 如果有 N 個(gè)樣品，則需要進(jìn)行 N+2 個(gè)樣品提取，多出的一個(gè)用作樣品制備陽(yáng)性對(duì)照管、另一個(gè)用作樣品制備陰性對(duì)照管。
三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照（用水做模板），6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照（用水做模板），1 個(gè)用于PCR 陽(yáng)性對(duì)照。
參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)品名稱：大麥內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)PKABA1基因染料法PCR試劑盒
貨號(hào):CP96881
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
運(yùn)輸：低溫
注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

PCR檢測(cè)方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
(2)待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測(cè)目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問(wèn)題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測(cè)的可靠性。
步驟(2)為：待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
其中所述待測(cè)目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測(cè)目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
?實(shí)驗(yàn)方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

以下是大麥內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)PKABA1基因染料法PCR試劑盒公司正在熱銷的產(chǎn)品：
Chicken IL-18(Interleukin 18) ELISA Kit資源名稱真氧產(chǎn)堿菌種屬:Alcaligenes│eutrophus提供形式:凍干物

Chicken IL-1β(Interleukin 1 Beta) ELISA Kit資源名稱柱狀假絲酵母種屬:Candida cylindracea提供形式:凍干物

Chicken IL-2(Interleukin 2) ELISA Kit資源名稱雷氏普羅威登斯菌種屬:Providencia rettgeri分離基物:從ATCC 9250中分離

Chicken IL-3(Interleukin 3) ELISA Kit資源名稱阿伯丁沙門氏菌種屬:Salmonella aberdeen提供形式:凍干物

Chicken IL-4(Interleukin 4) ELISA Kit資源名稱千葉類芽胞桿菌種屬:Paenibacilluschibensis分離基物:土壤

Chicken IL-5(Interleukin 5) ELISA Kit資源名稱腐皮鐮孢菌（斜面）種屬:Fusarium solani分離基物:蘋果爛根

Chicken IL-6(Interleukin 6) ELISA Kit資源名稱藍(lán)色犁頭霉種屬:Absidia│coerulea提供形式:凍干物

Chicken IL-8(Interleukin 8) ELISA Kit資源名稱模仿葡萄球菌種屬:Staphylococcus simulans提供形式:凍干粉、斜面

Chicken IL-9(Interleukin 9) ELISA Kit資源名稱紫色紅曲菌種屬:Monascus│purpureus提供形式:凍干物

Chicken LH(Luteinizing Hormone) ELISA Kit資源名稱腸炎沙門氏菌亞種種屬:Salmonella enterica subsp.分離基物:進(jìn)口麥樂(lè)雞

Chicken LHRH/GnRH(Luteinizing Hormone Releasing Hormone) ELISA Kit資源名稱葡萄汁有孢漢遜酵母種屬:Hanseniaspora uvarum分離基物:蘋果

Chicken LIF(Leukemia Inhibitory Factor) ELISA Kit資源名稱高地芽胞桿菌種屬:Bacillus altitudinis分離基物:紅樹林土壤

Chicken MT(Melatonin) ELISA Kit資源名稱大腸埃希氏菌(凍干粉)種屬:Escherichia coli分離基物:人的糞便

Chicken NGF(Nerve Growth Factor) ELISA Kit資源名稱蛹蟲草(北冬蟲夏草，北蟲草)（斜面）種屬:Cordyceps militaris提供形式:斜面培養(yǎng)物，凍干物

Chicken NT-3(Neurotrophin-3) ELISA Kit資源名稱沼澤紅假單胞菌（菌液）（暫無(wú)）種屬:Rhodopseudomonas palustris提供形式:僅提供菌液

Chicken OPG(Osteoprotegerin) ELISA Kit資源名稱腸致病性大腸埃希氏菌種屬:Escherichia coli O157分離基物:腹瀉病例糞便標(biāo)本

Chicken Pg(Progesterone) ELISA Kit資源名稱金黃色葡萄球菌亞種種屬:Staphylococcus aureus subsp.aureus Rosenbach分離基物:臨床分離

Chicken S100A6(S100 Calcium Binding Protein A6) ELISA Kit資源名稱具核梭桿菌聚核亞種種屬:Fusobacterium nucleatum subsp nucleatum提供形式:凍干粉

Chicken SCF(Stem Cell Factor) ELISA Kit資源名稱巴氏芽孢桿菌種屬:Bacillus pasteurii提供形式:凍干粉

Chicken TIMP-2(Tissue Inhibitors of Metalloproteinase 2) ELISA Kit資源名稱艱難梭菌種屬:Clostridium difficile提供形式:凍干物
大麥內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)PKABA1基因染料法PCR試劑盒Apo B 100|Apo B 48|APOB|ApoB100|Apolipoprotein B|Apolipoprotein B 100|FLDB3%堿性蛋白胨水產(chǎn)品用途：3%堿性蛋白胨水用于嗜鹽性細(xì)菌特別是副溶血性弧菌及創(chuàng)傷弧菌的前增菌培養(yǎng)。(GB)產(chǎn)品規(guī)格：10mlX20支冷藏：2-8℃

ANF|ANP|ATFB6|Atrial natriuretic factor|Atrial natriuretic peptide|CDD ANF|CDP|NPPA|PND|Prepronatriodilatin弧菌顯色瓊脂培養(yǎng)基平板產(chǎn)品用途：弧菌顯色瓊脂培養(yǎng)基平板用于水產(chǎn)品及食物中毒樣品中弧菌特別是副溶血性弧菌的分離和初步鑒別。(GB、SN)產(chǎn)品規(guī)格;90mmX20個(gè)冷藏：2-8℃

BNP|BNP(1 32)|Natriuretic peptides B|NPPBBolton肉湯產(chǎn)品用途：Bolton肉湯用于空腸彎曲桿菌的選擇性增菌。(GB)產(chǎn)品規(guī)格：100mlX6瓶冷藏：2-8℃

NT-proBNP|N-Terminal Pro-Brain Natriuretic PeptideBolton肉湯(含羊血)產(chǎn)品用途：Bolton肉湯用于空腸彎曲桿菌的選擇性增菌。(GB)產(chǎn)品規(guī)格：225mlX6瓶冷藏：2-8℃

T3|Triiodothyronine改良CCD瓊脂平板產(chǎn)品用途：改良CCD瓊脂平板用于空腸彎曲桿菌的選擇性分離培養(yǎng)。(GB)規(guī)格：90mmX20個(gè)冷藏：2-8℃

T4|ThyroxineSkirrow瓊脂平板產(chǎn)品用途：Skirrow瓊脂平板用于空腸彎曲桿菌的選擇性分離培養(yǎng)。(GB)規(guī)格：90mmX20個(gè)冷藏：2-8℃

FSH(Follicle-Stimulating Hormone)改良磷酸鹽緩沖液(PSB)產(chǎn)品用途：改良磷酸鹽緩沖液(PSB)用于小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌的增菌培養(yǎng)。(GB、ISO)規(guī)格：225mlX6瓶冷藏：2-8℃

LH(Luteinizing Hormone)|Lutropin|LutrophinCIN-1瓊脂平板產(chǎn)品用途：CIN-1瓊脂平板用于小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌的選擇性分離培養(yǎng)。(GB)規(guī)格：90mmX20個(gè)冷藏：2-8℃