使用方法:
一、稀釋標準曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。
1. 標記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，*用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8. 如果有 N 個樣品，則需要進行 N+2 個樣品提取，多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。
三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20μL 體系，在樣品制備室進行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù)，則標記 N+9 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），6 個用于標準曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復(fù)，則標記 N+4 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），1 個用于PCR 陽性對照。
參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)品名稱：棉花內(nèi)標準sad1基因染料法PCR試劑盒
貨號:CP96893
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品運輸：低溫運輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
運輸：低溫
注意事項：1．基礎(chǔ)程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

PCR檢測方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；
(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。
其中所述參照基因為本領(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。
步驟(2)為：待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中所述待測目的基因為本領(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
?實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

以下是棉花內(nèi)標準sad1基因染料法PCR試劑盒公司正在熱銷的產(chǎn)品：
Human TF(Transferrin) ELISA Kit資源名稱韓國叢毛單胞菌種屬:Comamonaskoreensis分離基物:濕地，韓國

Human sTfR1(Soluble Transferrin Receptor1) ELISA Kit資源名稱腸膜明串珠菌種屬:Leuconostocmesenteroides安全等級:1

Human C-P(C-Peptide) ELISA Kit資源名稱Dokdonellafugitiva種屬:Dokdonellafugitiva分離基物:盆栽土壤

Human PI(Proinsulin) ELISA Kit資源名稱Dokdonellaginsengisoli種屬:Dokdonellaginsengisoli分離基物:人參場的土壤，韓國

Human hCG-H(Hyperglycosylated Chorionic Gonadotropin) ELISA Kit資源名稱短短芽孢桿菌種屬:Brevibacillus│brevis分離基物:植物根際土壤

Human FSH(Follicle-Stimulating Hormone) ELISA Kit資源名稱腸炎沙門氏菌亞利桑那亞種種屬:Salmonellaentericasubsp.arizonae提供形式:凍干粉

Human LTF(Lactoferrin) ELISA Kit資源名稱Sphingobiumjaponicum種屬:Sphingobiumjaponicum分離基物:菌株SS86的萘啶酸抗性突變株，山地實驗田

Human LH(Luteinizing Hormone) ELISA Kit資源名稱Sphingobiumrhizovicinum種屬:Sphingobiumrhizovicinum分離基物:山橘的根際土壤，中國臺灣

Human TSH(Thyroid Stimulating Hormone) ELISA Kit資源名稱長赤細菌種屬:Erythrobacterlongus分離基物:海藻,日本

Human IGFBP-5(Insulin-like growth factor-binding protein 5) ELISA Kit資源名稱海洋鹽單胞菌種屬:Cobetiamarina=HalomonASmarina分離基物:海水

Human MUC-1(Mucin-1) ELISA Kit資源名稱Georgeniamuralis種屬:Georgeniamuralis分離基物:中世紀的壁畫，奧地利

Human CALM1(Calmodulin) ELISA Kit資源名稱善變副球菌種屬:Paracoccus│versutus分離基物:油田水樣

Human sRAGE(Solube Receptor for Advanced Glycation End product) ELISA Kit資源名稱耐鹽芽孢桿菌種屬:Bacillushalodurans分離基物:土壤，日本

Human GFAP(Glial fibrillary acidic protein) ELISA Kit資源名稱德氏乳桿菌乳酸亞種（萊氏曼氏乳桿菌）種屬:Lactobacillusdelbrueckiisubsp.lactis＝Lactobacillusleichmannii安全等級:1

Human MBP/MBL(Mannose Binding Protein/Mannose Binding Lectin) ELISA Kit資源名稱斯氏李斯特氏菌種屬:Listeria seeligeri提供形式:凍干粉

Human IgA(Immunoglobulin A) ELISA Kit資源名稱乳酸乳球菌乳亞種種屬:Lactococcus lactis subsp. lactis提供形式:凍干物

Human IgE(Immunoglobulin E) ELISA Kit資源名稱Chryseobacteriumjeonii種屬:Chryseobacteriumjeonii分離基物:企鵝棲息地的蘚類

Human IgG(Immunoglobulin G) ELISA Kit資源名稱菩提奇異球菌種屬:Deinococcusficus＝Deinococcusmumbaiensis分離基物:受污染的營養(yǎng)平板，印度

Human IgM(Immunoglobulin M) ELISA Kit資源名稱拜氏梭菌種屬:Clostridium beijerinckii提供形式:凍干物

Human PR-3(Proteinase-3) ELISA Kit資源名稱干燥棒桿菌種屬:Corynebacteriumxerosis分離基物:小孩耳朵排泄物
棉花內(nèi)標準sad1基因染料法PCR試劑盒IgG(Immunoglobulin G)營養(yǎng)瓊脂(普通肉湯瓊脂培養(yǎng)基)用途：營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基NA用于細菌總數(shù)測定、保存菌種及純培養(yǎng)，也可用于消毒效果測定(GB/T4789.28-2003中4.7，GB/T4789.2-2003，GB15979-2002和GB15981-1995，ISO標準)。原理：

IGF-1|IGF1|IGFI|IGF-I|IGF1A|IGF-IA|IGF-IB|MGF|Somatomedin C伊紅美藍瓊脂(EMB)用途：伊紅美藍瓊脂(EMB)用于分離革蘭氏陰性腸道菌特別是大腸菌群和糞大腸菌群(GB/T4789.38-2008，GB15979-2002，SN0169-92，化妝品衛(wèi)生規(guī)范2007版和GB5750.12-2006)。原理：

IgA(Immunoglobulin A)MC培養(yǎng)基用途：MC培養(yǎng)基用于乳酸菌飲料中乳酸菌的菌落計數(shù)(GB/T4789.35-2010)。原理：

IgM(Immunoglobulin M)改良山梨醇麥康凱瓊脂配套試劑

IFN-gamma乳糖膽鹽培養(yǎng)基（不含中和劑）用途：乳糖膽鹽培養(yǎng)基（不含中和劑）用于化妝品中糞大腸菌群的檢測(化妝品衛(wèi)生規(guī)范微生物檢驗方法)。原理：

SAA(Serum Amyloid A)卵磷脂吐溫80營養(yǎng)瓊脂TTC卵磷脂、吐溫80-營養(yǎng)瓊脂基礎(chǔ)(TTCLecithinTween-80NutrientAgarBase)用途：

PRL(Prolactin)|Lactotrope|LTH|Luteotropic Hormone沙氏液體培養(yǎng)基用途：沙氏液體培養(yǎng)基用于真菌的增菌培養(yǎng)，還用于一次性使用衛(wèi)生用品真菌定性檢測(GB15979-2002)。原理：

α-La(Alpha-Lactalbumin)沙氏瓊脂培養(yǎng)基用途：沙氏瓊脂培養(yǎng)基用于真菌的分離培養(yǎng)，還用于一次性使用衛(wèi)生用品真菌菌落總數(shù)檢測(GB15979-2002)。原理：