使用方法:
一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，*用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 陽(yáng)性對(duì)照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產(chǎn)品跟市場(chǎng)上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8. 如果有 N 個(gè)樣品，則需要進(jìn)行 N+2 個(gè)樣品提取，多出的一個(gè)用作樣品制備陽(yáng)性對(duì)照管、另一個(gè)用作樣品制備陰性對(duì)照管。
三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照（用水做模板），6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照（用水做模板），1 個(gè)用于PCR 陽(yáng)性對(duì)照。
參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)品名稱：轉(zhuǎn)基因品系大豆W98探針?lè)╭PCR試劑盒
貨號(hào):CP96984
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
運(yùn)輸：低溫
注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

PCR檢測(cè)方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
(2)待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測(cè)目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問(wèn)題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測(cè)的可靠性。
步驟(2)為：待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
其中所述待測(cè)目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測(cè)目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
?實(shí)驗(yàn)方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

以下是轉(zhuǎn)基因品系大豆W98探針?lè)╭PCR試劑盒公司正在熱銷的產(chǎn)品：
Human MYL1(Myosin Light Chain 1, Alkali, Fast Skeletal) ELISA Kit資源名稱類鼻疽桿菌種屬:Malleomyces│pseudomallei提供形式:凍干物

Human NAGase(N-Acetyl Beta-D-Glucosaminidase) ELISA Kit資源名稱類鼻疽假單胞菌種屬:Pseudomonas│pseudomallei提供形式:凍干物

Human NAP(Neutrophil Alkaline Phosphatase) ELISA Kit資源名稱單核細(xì)胞增生利斯特氏種屬:Listeria│monocytogenes提供形式:凍干物

Human NEB(Noradrenaline Bitartas) ELISA Kit資源名稱羊布氏菌種屬:Brucella│melitensis提供形式:凍干物

Human NEF3(Neurofilament 3) ELISA Kit資源名稱牛布氏菌種屬:Brucella│abortus提供形式:凍干物

Human NPT(Neopterin) ELISA Kit資源名稱綿羊布氏菌種屬:Brucella│ovis提供形式:凍干物

Human N-ERC(Mesothelin) ELISA Kit資源名稱犬布魯氏菌種屬:Brucella│canis提供形式:凍干物

Human NFE2L2(Nuclear Factor, Erythroid Derived 2 Like 2) ELISA Kit資源名稱問(wèn)號(hào)狀鉤端螺旋體種屬:Leptospira│interrogans提供形式:凍干物

Human NFκB(Nuclear Factor Kappa B) ELISA Kit資源名稱次要分枝桿菌種屬:Mycobacterium│triviale提供形式:凍干物

Human NF-κB p65(Nuclear Factor Kappa B p65) ELISA Kit資源名稱潰瘍分枝桿菌種屬:Mycobacterium│ulcerans提供形式:凍干物

Human NKA(Neurokinin A) ELISA Kit資源名稱鄉(xiāng)村分枝桿菌種屬:Mycobacterium│Mycobacterium agreste提供形式:凍干物

Human NKB(Neurokinin B) ELISA Kit資源名稱蜂房分枝桿菌種屬:Mycobacterium│Mycobacterium alvei提供形式:凍干物

Human N-MID-OT(N-MID Osteocalcin) ELISA Kit資源名稱戈登分枝桿菌種屬:Mycobacterium│Mycobacterium gordonae提供形式:凍干物

Human NPYR1(Neuropeptide Y Receptor Y1) ELISA Kit資源名稱瘰疬分枝桿菌種屬:Mycobacterium│Mycobacterium scrofulaceum提供形式:凍干物

Human NPYR2(Neuropeptide Y Receptor Y2) ELISA Kit資源名稱產(chǎn)鼻疽分支桿菌塞內(nèi)加爾亞種種屬:Mycobacterium│Mycobacterium farcinogenes subsp. senegalense提供形式:凍干物

Human NPYR5(Neuropeptide Y Receptor Y5) ELISA Kit資源名稱鳥分枝桿菌森林土壤亞種種屬:Mycobacterium│Mycobacterium avium subsp silvaticum提供形式:凍干物

Human NRG-2(Neuregulin 2) ELISA Kit資源名稱海分枝桿菌種屬:Mycobacterium│Mycobacterium marinum提供形式:凍干物

Human NRG-3(Neuregulin 3) ELISA Kit資源名稱威斯康星米勒菌種屬:Moelerella│wisconsensis提供形式:凍干物

Human NRG-4(Neuregulin 4) ELISA Kit資源名稱產(chǎn)酸克雷伯菌種屬:Klebsiella│oxytoca提供形式:凍干物

Human NT-ProANP(N-Terminal Pro Atrial Natriuretic Peptide) ELISA Kit資源名稱烏克曼枸櫞酸桿菌種屬:Citrobacter│werkmanii提供形式:凍干物
轉(zhuǎn)基因品系大豆W98探針?lè)╭PCR試劑盒Cyclophilin F| Cyp D| CYP3| peptidylprolyl isomerase F| PPIase F| PPIF| Rotamase F形態(tài)特性  淋巴母細(xì)胞樣生長(zhǎng)特性 懸浮生長(zhǎng)特征特性  CA46細(xì)胞系源于Burkitt's淋巴瘤病人的腹水液，是Ｍａｇｒａｔｈ建立的系列淋巴瘤細(xì)胞系之一。該細(xì)胞系ＥＢＶ核抗原（ＥＢＮＡ）陰性，表達(dá)表面ＩｇＭ　和分泌不能與Ａ蛋白結(jié)合的ＩｇＭ，１２％的群體細(xì)胞表達(dá)補(bǔ)體受體，但不表達(dá)Ｆｃ受體。細(xì)胞生長(zhǎng)的群體倍增時(shí)間是１６小時(shí)，具較快的生長(zhǎng)速度。 培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS　

CYB5R2|NADH-cytochrome b5 reductase 2|b52形態(tài)特性  上皮細(xì)胞樣生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)特征特性  ACHN細(xì)胞系建系于1979年，衍生于一個(gè)患惡性腎癌的22歲男性白人病料。細(xì)胞系在MNM培養(yǎng)液中穩(wěn)定傳代150天，然后大量增殖接種裸鼠，4周后產(chǎn)生明顯的局部浸染性腫瘤。干擾素可抑制該細(xì)胞系增殖，因此，ACHN細(xì)胞可用于人干擾素和干擾素誘導(dǎo)劑的抗細(xì)胞增殖研究。 培養(yǎng)條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS；1%NEAA

Fructose-bisphosphate aldolase C|Brain-type aldolase|ALDOC|ALDC形態(tài)特性  上皮細(xì)胞樣生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)特征特性  769-P細(xì)胞建系于1975年，衍生于一個(gè)患原發(fā)性腎細(xì)胞腺癌的58歲女性白人腎組織。該細(xì)胞呈球狀，并有模糊的細(xì)胞邊沿和*的核質(zhì)比例。細(xì)胞連續(xù)傳29代后群體倍增時(shí)間為34.8h，且能在軟瓊脂培養(yǎng)液上增殖。細(xì)胞接種免疫抑制的倉(cāng)鼠頰產(chǎn)生實(shí)體腫瘤。 培養(yǎng)條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS　

36 53aa|CALNA3|CAM PRP catalytic subunit|CNA3|PPP3CC形態(tài)特性  上皮細(xì)胞樣生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)特征特性  該細(xì)胞來(lái)源于一位日本病人的手術(shù)切除的腫瘤組織。電鏡下可以看到細(xì)胞間典型的橋粒和細(xì)胞質(zhì)中大量的張力絲。1975年發(fā)現(xiàn)有支原體污染，而后被去除。該細(xì)胞整合有HPV16基因組，每個(gè)細(xì)胞中有1~2個(gè)拷貝。 培養(yǎng)條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  10%FBS　

DHH|Desert hedgehog protein|HHG-3|desert hedgehog|desert hedgehog homolog形態(tài)特性  上皮細(xì)胞樣生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)特征特性  SK-OV-3由Trempe G和Old LJ在1973年從一位64歲白人女性卵巢腺癌患者的腹腔積液分離得到。該細(xì)胞對(duì)腫瘤壞死因子和幾種細(xì)胞毒性藥物（包括白喉毒素、順鉑和阿霉素）耐受。在裸鼠中成瘤，且形成與卵巢原位癌一致的中度分化的腺癌。 培養(yǎng)條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS　

CSNK2A1|CK2A1|casein kinase 2|alpha 1 polypeptide|casein kinase II alpha 1 subunit|CK II alpha|CK2 catalytic subunit alpha|casein kinase II subunit alpha|CKII|protein kinase CK2形態(tài)特性  上皮細(xì)胞樣生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)特征特性  BIU-87建系于1989年（俞莉章等）。該細(xì)胞系來(lái)源于人膀胱狀移行上皮癌，通常采用5×108細(xì)胞0.2ml接種裸鼠皮下，呈進(jìn)行性腫瘤生長(zhǎng)，腫瘤結(jié)節(jié)病檢與原標(biāo)本癌組織相似。22代細(xì)胞群體倍增時(shí)間為34小時(shí)。細(xì)胞能在軟瓊脂上生長(zhǎng)，克隆形成率23%。BIU-87細(xì)胞系對(duì)ConA，WGA，PSL均有凝集反應(yīng)。 培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS　

C21orf83|PFM15|PR domain containing 15|PRDM15|Zinc finger protein 298|ZNF298形態(tài)特性  淋巴母細(xì)胞樣生長(zhǎng)特性 懸浮生長(zhǎng)特征特性  KG1細(xì)胞系由H.P.Koeffler和D.W.Golde建立。骨髓抽自一個(gè)59歲的患有紅白血病而后又發(fā)展成急性骨髓原性白血病的男性白人。 KG1細(xì)胞在形態(tài)上類似急性髓原白血病，表現(xiàn)為明顯的多形化，骨髓母細(xì)胞和骨髓細(xì)胞占優(yōu)勢(shì)。 少量細(xì)胞是成熟的粒細(xì)胞，也有微量的巨噬細(xì)胞和嗜曙紅細(xì)胞。 培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS　

α-La(Alpha-Lactalbumin)形態(tài)特性  上皮細(xì)胞樣生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)特征特性  AN3CA細(xì)胞建系 于1964年。它衍生于子宮內(nèi)膜癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組織，具有癌細(xì)胞的基本特性，能在體外長(zhǎng)期傳代培養(yǎng)，接種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物產(chǎn)生明顯腫瘤。但細(xì)胞的生物學(xué)特性及超微結(jié)構(gòu)尚未深入研究，僅發(fā)現(xiàn)該細(xì)胞系促黑激素合成為陰性。細(xì)胞常用于人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞生物學(xué)及其相關(guān)特性研究。 培養(yǎng)條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS；1%NEAA