實(shí)驗(yàn)方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)品名稱(chēng)：轉(zhuǎn)基因品系大豆W62染料法qPCR試劑盒
貨號(hào):CP96980
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
運(yùn)輸：低溫
注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

PCR檢測(cè)方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)；
(2)待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。
其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為T(mén)A cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測(cè)目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問(wèn)題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測(cè)的可靠性。
步驟(2)為：待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
其中所述待測(cè)目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測(cè)目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
使用方法:
一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，*用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 陽(yáng)性對(duì)照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產(chǎn)品跟市場(chǎng)上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8. 如果有 N 個(gè)樣品，則需要進(jìn)行 N+2 個(gè)樣品提取，多出的一個(gè)用作樣品制備陽(yáng)性對(duì)照管、另一個(gè)用作樣品制備陰性對(duì)照管。
三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照（用水做模板），6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。如果做定性分析，并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照（用水做模板），1 個(gè)用于PCR 陽(yáng)性對(duì)照。

以下是轉(zhuǎn)基因品系大豆W62染料法qPCR試劑盒公司正在熱銷(xiāo)的產(chǎn)品：
Human HO2(Heme Oxygenase 2) ELISA Kit資源名稱(chēng)沙門(mén)氏菌種屬:Salmonella│sp.提供形式:其他

Human HSF2(Heat Shock Transcription Factor 2) ELISA Kit資源名稱(chēng)埃森沙門(mén)氏菌種屬:Salmonella│essen提供形式:其他

Human HSP-70(Heat Shock Protein 70) ELISA Kit資源名稱(chēng)馬流產(chǎn)沙門(mén)氏菌種屬:Salmonella│abortus-equi提供形式:凍干物

Human HSPG(Heparan Sulfate Proteoglycan) ELISA Kit資源名稱(chēng)湯卜遜沙門(mén)氏菌柏林變種種屬:Salmonella│thompson var.berlin提供形式:凍干物

Human HSPβ6/HSP-20(Heat Shock Protein Beta 6) ELISA Kit資源名稱(chēng)維爾肖沙門(mén)氏菌種屬:Salmonella│virchow提供形式:凍干物

Human HYOU1(Hypoxia Up Regulated 1) ELISA Kit資源名稱(chēng)杜塞爾多夫沙門(mén)氏菌種屬:Salmonella│duesseldorf提供形式:凍干物

Human IAP(Integrin Associated Protein) ELISA Kit資源名稱(chēng)塔拉哈西沙門(mén)氏菌種屬:Salmonella│tallahassee提供形式:凍干物

Human IAP(immunosuppressive acidic protein) ELISA Kit資源名稱(chēng)爪哇那沙門(mén)氏菌種屬:Salmonella│javiana提供形式:凍干物

Human IER3(Immediate Early Response 3) ELISA Kit資源名稱(chēng)厄班那沙門(mén)氏菌種屬:Salmonella│urbana提供形式:凍干物

Human IFABP/FABP2(Intestinal Fatty Acid Binding Protein) ELISA Kit資源名稱(chēng)阿德萊德沙門(mén)氏菌種屬:Salmonella│adelaide提供形式:凍干物

Human IFN-α(Interferon Alpha) ELISA Kit資源名稱(chēng)韋克羅斯沙門(mén)氏菌種屬:Salmonella│waycross提供形式:凍干物

Human IgA1(Immunoglobulin A1) ELISA Kit資源名稱(chēng)維斯拉哥沙門(mén)氏菌種屬:Salmonella│weslaco提供形式:凍干物

Human IgA2(Immumoglobulin A2) ELISA Kit資源名稱(chēng)鼠傷寒沙門(mén)氏菌賓斯變種種屬:Salmonella│typhimurium var.binns提供形式:凍干物

Human IGF2BP3(Insulin Like Growth Factor 2 mRNA Binding Protein 3) ELISA Kit資源名稱(chēng)海德?tīng)柋ど抽T(mén)氏菌種屬:Salmonella│heidelberg提供形式:凍干物

Human IGF2R(Insulin Like Growth Factor 2 Receptor) ELISA Kit資源名稱(chēng)阿邦尼沙門(mén)氏菌種屬:Salmonella│abony提供形式:凍干物

Human IGFALS(Insulin Like Growth Factor Binding Protein, Acid Labile Subunit) ELISA Kit資源名稱(chēng)豬傷寒沙門(mén)氏菌武達(dá)森變種種屬:Salmonella│typhi-suis var.voldagsen提供形式:凍干物

Human IgG1(Immunoglobulin G1) ELISA Kit資源名稱(chēng)波茨坦沙門(mén)氏菌種屬:Salmonella│potsdam提供形式:凍干物

Human IgG2(Immunoglobulin G2) ELISA Kit資源名稱(chēng)慕尼黑沙門(mén)氏菌種屬:Salmonella│muenchen提供形式:凍干物

Human IgG3(Immunoglobulin G3) ELISA Kit資源名稱(chēng)羅斯托克沙門(mén)氏菌種屬:Salmonella│rostock提供形式:凍干物

Human IgG4(Immunoglobulin G4) ELISA Kit資源名稱(chēng)莫斯科沙門(mén)氏菌種屬:Salmonella│moscow提供形式:凍干物
轉(zhuǎn)基因品系大豆W62染料法qPCR試劑盒Glucose phosphomutase 1|PGM 1|PGM1|phosphoglucomutase 1形態(tài)特性  上皮細(xì)胞樣生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)特征特性  這株細(xì)胞來(lái)源于原發(fā)性透明細(xì)胞腺癌。細(xì)胞呈邊界不清楚的球形，高核質(zhì)比，有微絨毛和橋粒?？梢栽谲洯傊猩L(zhǎng)。 培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%

UBE2A|RAD6A|UBE2A|HHR6A|HR6A|RAD6 homolog A|UBC2|Ubiquitin carrier protein A|ubiquitin-conjugating enzyme E2 A|Ubiquitin-protein ligase A形態(tài)特性  混合形生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)特征特性  注意： 據(jù)報(bào)道來(lái)自不同個(gè)體的膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞株U-118 MG (HTB-15) 和 U-138 MG (HTB-16)有著一致的VNTR和相近的STR模式。 U-118 MG 和 U-138 MG細(xì)胞遺傳學(xué)上很相似并有至少六個(gè)衍生標(biāo)記染色體。 這是1966年至1969年間J. Ponten和同事從惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤中構(gòu)建的細(xì)胞株中的一株(其它包括ATCC HTB-14和 ATCC HTB-16 and ATCC HTB-17)。 1987年用BM-Cycline培養(yǎng)6周去除了支原體污染。 培養(yǎng)條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%

PHD2形態(tài)特性  上皮樣；多角生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)特征特性   培養(yǎng)條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%

MUSK(Muscle Skeletal Receptor Tyrosine Kinase)|Muscle-specific Receptor Tyrosine Kinase|muscle|skeletal|receptor tyrosine kinase|skeletal receptor tyrosine-protein kinase形態(tài)特性  上皮細(xì)胞樣生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)特征特性  該細(xì)胞源自一名58歲患有膀胱移行細(xì)胞癌的白人男性。胞內(nèi)無(wú)橋粒，有大量粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及突出絨毛，表達(dá)ras基因。 培養(yǎng)條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS

C20orf104|GLEA2|Glioma expressed antigen 2|HCA58|Novel zinc finger protein|NZF|PHD finger protein 20|PHF20|Transcription factor TZP|TZP形態(tài)特性  上皮樣；多角　生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)特征特性  1974年A. Leibovitz從期移行細(xì)胞瘤中建立了SW細(xì)胞株。 患者接受過(guò)術(shù)前化療(Thiotepa)。 報(bào)道稱(chēng)此細(xì)胞的植板率為41%。 培養(yǎng)條件  L15: Leibovitz Medium  優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%

AMACR|AMACRD|CBAS4|RACE|RM|2-methylacyl-CoA racemase|alpha-methylacyl-CoA racemase|形態(tài)特性  淋巴母細(xì)胞樣生長(zhǎng)特性 懸浮生長(zhǎng)特征特性  COC1細(xì)胞建系于1993年（熊世鋼等）。細(xì)胞于原代培養(yǎng)至第17天傳代，以后反復(fù)傳代，生物學(xué)特性穩(wěn)定。可表達(dá)多種腫瘤標(biāo)志物和野生型P53蛋白、突變型P53蛋白。裸鼠接種產(chǎn)生分化差的腺癌。 培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS　

LRP8(Low-density lipoprotein receptor-related protein 8)|APOER2|LRP-8|Apolipoprotein E receptor 2|Lr8b|MCI1|Apolipoprotein E R2形態(tài)特性  上皮細(xì)胞樣生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)特征特性  Z初認(rèn)為這個(gè)細(xì)胞源自喉上皮癌，但隨后通過(guò)同工酶分析、HeLa標(biāo)記染色體和DNA指紋分析發(fā)現(xiàn)，該細(xì)胞已被HeLa污染；角蛋白陽(yáng)性。 培養(yǎng)條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  10%FBS　

p110 BETA|PI3 Kinase p110 beta|PI3 kinase subunit beta|PI3K|PI3K beta|PI3K p110(beta)|PI3Kbeta|PI3KCB|PIK3C1|PIK3CB|PtdIns 3 kinase subunit beta形態(tài)特性  上皮細(xì)胞樣生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)　特征特性  該細(xì)胞來(lái)源于一名15歲的白人少年的肝癌組織。該細(xì)胞表達(dá)甲胎蛋白、白蛋白、α-2-巨球蛋白、α-1-抗胰蛋白酶、轉(zhuǎn)鐵蛋白、α-1-抗凝乳蛋白酶、結(jié)合珠蛋白、銅藍(lán)蛋白、纖溶酶原、補(bǔ)體C4、C3激活物、纖維蛋白原、α-1酸性糖蛋白、α-2-HS-糖蛋白、β-脂蛋白、視黃醇結(jié)合蛋白；表達(dá)胰島素受體和胰島素樣生長(zhǎng)因子IGFⅡ的受體；該細(xì)胞具有3-羥基-3-甲酰輔酶A還原酶和肝甘油三酯脂肪酶的活性。目前尚未證明該細(xì)胞中有HBV基因組。 培養(yǎng)條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS