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使用方法:
一、稀釋標準曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。
1. 標記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，*用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8. 如果有 N 個樣品，則需要進行 N+2 個樣品提取，多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。
三、設置 qPCR 反應（20μL 體系，在樣品制備室進行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復，則標記 N+9 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），6 個用于標準曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復，則標記 N+4 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），1 個用于PCR 陽性對照。
參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)品名稱：轉(zhuǎn)基因品系大豆A2704-21染料法qPCR試劑盒
貨號:CP96950
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品運輸：低溫運輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
運輸：低溫
注意事項：1．基礎(chǔ)程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應體系與反應條件。

PCR檢測方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；
(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。
其中所述參照基因為本領(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。
步驟(2)為：待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中所述待測目的基因為本領(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
?實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl     dNTP mix （2mM）
4 μl     引物1（10pM）
2 μl     引物2（10pM）
2 μl     Taq酶（2U/μl）
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl      加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結(jié)束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

以下是轉(zhuǎn)基因品系大豆A2704-21染料法qPCR試劑盒公司正在熱銷的產(chǎn)品：
Human SYP(Synaptophysin) ELISA Kit資源名稱泛菌種屬:Pantoea│sp.分離基物:市售水產(chǎn)體表

Human BST1(ADP-ribosyl cyclase 2) ELISA Kit資源名稱氣微菌種屬:Aeromicrobium│sp.分離基物:土壤

Human PIICP(C-terminal propeptide of Collagen alpha-1(II)chain) ELISA Kit資源名稱茄科雷爾氏菌種屬:Ralstonia solanacearum分離基物:辣椒

Human PIINP(N-terminal propeptide of Collagen alpha-1(II)chain) ELISA Kit資源名稱馬鏈球菌獸瘟亞種(馬鏈球菌動物傳染病亞種)種屬:Streptococcus│equi subsp. Zooepidemicus分離基物:土壤

Human DCP(Des-gamma carboxyprothrombin) ELISA Kit資源名稱冷解糖芽孢桿菌種屬:Bacillus│psychrosaccharolyticus分離基物:土壤樣品

Human WNT3A(Protein Wnt-3a) ELISA Kit資源名稱食瓊脂類芽孢桿菌種屬:Paenibacillus│agaridevorans分離基物:土壤樣品

Human SMAD2(Mothers against decapentaplegic homolog 2) ELISA Kit資源名稱埃特*瘤菌種屬:Rhizobium│etli分離基物:土壤樣品

Human Smad3/MADH3(Mothers Against Decapentaplegic Homolog 3) ELISA Kit資源名稱金黑小單胞菌種屬:Micromonospora│auratinigra分離基物:土壤樣品

Human PPRC1(Peroxisome prolifeRator-activated receptor gamma coactivator-related protein 1) ELISA Kit資源名稱苜蓿中華根瘤菌種屬:Sinorhizobium meliloti提供形式:斜面培養(yǎng)物

Human CD24(Signal transducer CD24) ELISA Kit資源名稱木糖氧化產(chǎn)堿桿菌種屬:Alcaligenes│xylosoxidans分離基物:醫(yī)療用品

Human RPESP(RPE-spondin) ELISA Kit資源名稱沙地芽孢桿菌種屬:Bacillus│aquimaris分離基物:土壤

Human SEMA3G(Semaphorin-3G) ELISA Kit資源名稱解酪蛋白巨大球菌種屬:Macrococcus│caseolyticus分離基物:土壤

Human ZG16B(Zymogen granule protein 16 homolog B) ELISA Kit資源名稱遲鈍愛得華氏菌種屬:Edwardsiella│tarda分離基物:短鰭紅娘魚腸胃道

Human ZG16(Zymogen granule membrane protein 16) ELISA Kit資源名稱脫色希瓦氏菌種屬:Shewanella│decolorationis分離基物:草魚腸胃道

Human LDHA(L-lactate dehydrogenase A chain) ELISA Kit資源名稱格氏沙雷菌種屬:Serratia│grimesii分離基物:草魚腸胃道

Human LDHC(L-lactate dehydrogenase C chain) ELISA Kit資源名稱志賀氏菌種屬:Shigella│sp.分離基物:短鰭紅娘魚腸胃道

Human UCN(Urocortin) ELISA Kit資源名稱玫瑰色庫克菌種屬:Kocuria│rosea分離基物:短鰭紅娘魚腸胃道

Human SOD3(Extracellular superoxide dismutase [Cu-Zn]) ELISA Kit資源名稱黃色短波單胞菌種屬:Brevundimonas│aurantiaca分離基物:草魚腸胃道

Human GP6(Platelet glycoprotein VI) ELISA Kit資源名稱類產(chǎn)堿假單胞菌種屬:Pseudomonas│pseudoalcaligenes分離基物:土壤

Human LPCAT3(Lysophospholipid acyltransferase 5) ELISA Kit資源名稱黑座克雷伯氏菌種屬:Klebsiella│variicola分離基物:草魚腸胃道
轉(zhuǎn)基因品系大豆A2704-21染料法qPCR試劑盒MT1E(Metallothionein-1E)|MT-1E形態(tài)特性上皮細胞樣生長特性松散貼壁特征特性該細胞1976年建系，源自一位48歲患有癌女性的胸腔積液，但近來有研究證明該細胞被M14黑色素瘤細胞污染。培養(yǎng)條件 L15: Leibovitz Medium 10% FBS

PLD2(Phospholipase D2)|Phosphatidylcholine-hydrolyzing phospholipase D2|Choline phosphatase 2|PLD1C|hPLD2形態(tài)特性多角形生長特性貼壁生長特征特性該細胞源于一名43歲患有腺癌女性的胸腔積液。培養(yǎng)條件 L15: Leibovitz Medium 10% FBS；10 mcg/ml insulin, 16 mcg/ml glutathione

GPT2|AAT2(Alanine aminotransferase 2)|ALT2|Glutamic--pyruvic transaminase 2|Glutamate pyruvate transaminase 2(GPT 2)|Glutamic--alanine transaminase 2形態(tài)特性上皮細胞樣生長特性貼壁生長特征特性該細胞1987年建系，源自一位54歲患有非小細胞肺癌的白人男性，該患者為吸煙者。培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10% FBS

ITGAV(Integrin alpha-V)|CD51|MSK8|Vitronectin Receptor alpha|VNRA|antigen identified by monoclonal L230|CD51 antigen||integrin|alpha V(vitronectin receptor|alpha polypeptide|antigen CD51)|Vitronectin receptor subunit alpha|形態(tài)特性圓形生長特性懸浮生長特征特性該細胞1982年建系，源自非小細胞肺癌男性患者的轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)。培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10% FBS

KLK2(Kallikrein-2)|Glandular kallikrein-1(hGK-1)|Tissue kallikrein-2形態(tài)特性淋巴母細胞樣生長特性懸浮生長特征特性該細胞源自一位62歲患有骨髓瘤男性的胸腔積液，PCA-1、CD38陽性，EBNA陰性。培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10% FBS；0.05 Mm2-巰