實(shí)驗(yàn)方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)品名稱：玉米內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)zSSIIb基因PCR試劑盒
貨號(hào):CP96940
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
運(yùn)輸：低溫
注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

PCR檢測(cè)方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
(2)待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測(cè)目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問(wèn)題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測(cè)的可靠性。
步驟(2)為：待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
其中所述待測(cè)目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測(cè)目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
使用方法:
一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，*用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 陽(yáng)性對(duì)照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產(chǎn)品跟市場(chǎng)上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8. 如果有 N 個(gè)樣品，則需要進(jìn)行 N+2 個(gè)樣品提取，多出的一個(gè)用作樣品制備陽(yáng)性對(duì)照管、另一個(gè)用作樣品制備陰性對(duì)照管。
三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照（用水做模板），6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照（用水做模板），1 個(gè)用于PCR 陽(yáng)性對(duì)照。

以下是玉米內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)zSSIIb基因PCR試劑盒公司正在熱銷的產(chǎn)品：
Human MCFD2(Multiple coagulation factor deficiency protein 2) ELISA Kit資源名稱黃粘蓋牛肝菌種屬:Suillus│flavidus (Fr.) J. Presl提供形式:斜面培養(yǎng)物

Human CD177(CD177 antigen) ELISA Kit資源名稱褐環(huán)粘蓋牛肝菌種屬:Suillus│luteus (L.) Roussel提供形式:斜面培養(yǎng)物

Human ITGB3(Integrin beta-3) ELISA Kit資源名稱東方栓菌種屬:Trametes│orientalis (Yasuda) Imazeki分離基物:倒木

Human MPP6(MAGUK p55 subfamily member 6) ELISA Kit資源名稱淡色叢赤殼種屬:Bionectria│ochroleuca (Schwein.) Schroers & Samuels分離基物:林區(qū)土壤

Human HADH(Hydroxyacyl-coenzyme A dehydrogenase, mitochondrial) ELISA Kit資源名稱真姬離褶傘種屬:Lyophyllum│shimeji (Kawam.) Hongo分離基物:子實(shí)體

Human DMBT1(Deleted in malignant brain tumors 1 protein) ELISA Kit資源名稱光滑環(huán)銹傘種屬:Pholiota│nameko (T. Itô) S. Ito & S. Imai提供形式:斜面培養(yǎng)物

Human CDK5R1(Cyclin-dependent kinase 5 activator 1) ELISA Kit資源名稱野生紫孢側(cè)耳種屬:Pleurotus│sapidus (Schulzer) Sacc.分離基物:子實(shí)體

Human CES2(Cocaine esterase) ELISA Kit資源名稱血紅密孔菌種屬:Pycnoporus│sanguineus (L.) Murrill分離基物:基物

Human WTAP(Pre-mRNA-splicing regulator WTAP) ELISA Kit資源名稱淡綠紅菇種屬:Russula│violeipes Quél.提供形式:斜面培養(yǎng)物

Human SNX1(Sorting nexin-1) ELISA Kit資源名稱血痕韌革菌種屬:Stereum│sanguinolentum (Alb. & Schwein.) Fr.分離基物:基質(zhì)

Human LGALS3BP(Galectin-3-binding protein) ELISA Kit資源名稱粘滑菇屬種屬:Hebeloma│sp.分離基物:子實(shí)體

Human CFLAR(P8 and FADD-like apoptosis regulator) ELISA Kit資源名稱復(fù)瓣黑刺革菌種屬:Hymenochaete│adusta (Lév.) Har. & Pat.分離基物:基質(zhì)

Human R(Extracellular calcium-sensing receptor) ELISA Kit資源名稱漏斗狀側(cè)耳種屬:Lentinus│sajor-caju (Fr.) Fr.分離基物:基質(zhì)

Human PACAPR1(Pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide type I receptor) ELISA Kit資源名稱肉色香蘑種屬:Lepista│irina (Fr.) H.E. Bigelow分離基物:基物

Human VIPR1(Vasoactive intestinal polypeptide receptor 1) ELISA Kit資源名稱煙管菌種屬:Bjerkandera│adusta (Willd.) P. Karst.提供形式:斜面培養(yǎng)物

Human VIPR2(Vasoactive intestinal polypeptide receptor 2) ELISA Kit資源名稱半球蓋田頭菇種屬:Agrocybe│pediades (Fr.) Fayod分離基物:子實(shí)體

Human DDR1(Epithelial discoidin domain-containing receptor 1) ELISA Kit資源名稱琥珀乳牛肝菌種屬:Suillus│placidus (Bonord.) Singer分離基物:子實(shí)體

Human DVL1(Segment polarity protein dishevelled homolog DVL-1) ELISA Kit資源名稱虎皮粘蓋牛肝菌種屬:Suillus│pictus (Peck) A.H. Sm. & Thiers分離基物:子實(shí)體

Human PLEC(Plectin) ELISA Kit資源名稱粘蓋牛肝菌種屬:Suillus│bovinus (Pers.) Roussel分離基物:子實(shí)體

Human SFN(14-3-3 protein sigma) ELISA Kit資源名稱彩色豆馬勃種屬:Pisolithus│arhizus (Scop.) Rauschert分離基物:子實(shí)體
玉米內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)zSSIIb基因PCR試劑盒FABP1(Fatty Acid Binding Protein 1|Liver)|L?FABP|FABPL|Liver-type fatty acid-binding protein形態(tài)特性  淋巴母細(xì)胞樣生長(zhǎng)特性 懸浮生長(zhǎng)特征特性  該細(xì)胞來(lái)源于一彝族女性的外周血。1994年由中國(guó)科學(xué)院昆明細(xì)胞庫(kù)通過(guò)EB病毒轉(zhuǎn)化的方法建立。 培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  15%NBS

IL36G|Interleukin-36 gamma|Interleukin-1 homolog 1(IL-1H1)|Interleukin-1 family member 9(IL-1F9)|IL-1-related protein 2(IL-1RP2)|Interleukin-1 epsilon(IL-1 epsilon)形態(tài)特性  淋巴母細(xì)胞樣生長(zhǎng)特性 懸浮生長(zhǎng)特征特性  該細(xì)胞來(lái)源于一正常女性的外周血。1993年由中國(guó)科學(xué)院昆明細(xì)胞庫(kù)通過(guò)EB病毒轉(zhuǎn)化的方法建立。 培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  15%NBS

GSK3β(Glycogen Synthase Kinase 3 Beta)|GSK3B|glycogen synthase kinase-3 beta|GSK-3 beta|GSK3beta isoform形態(tài)特性  淋巴母細(xì)胞樣生長(zhǎng)特性 懸浮生長(zhǎng)特征特性  該細(xì)胞來(lái)源于一女性重癥肌無(wú)力患者的外周血。1994年由中國(guó)科學(xué)院昆明細(xì)胞庫(kù)通過(guò)EB病毒轉(zhuǎn)化的方法建立。 培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  15%NBS

NPS(Neuropeptide S)形態(tài)特性  淋巴母細(xì)胞樣生長(zhǎng)特性 懸浮生長(zhǎng)特征特性  該細(xì)胞來(lái)源于一女性慢性粒細(xì)胞白血病患者的外周血。1994年由中國(guó)科學(xué)院昆明細(xì)胞庫(kù)通過(guò)EB病毒轉(zhuǎn)化的方法建立。 培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  15%NBS

APOA2|Apo-AII|ApoA-II|apoAII|Apo-A2|Apolipoprotein A-II|Alp-2|Hdl-1|Apolipoprotein A2形態(tài)特性  淋巴母細(xì)胞樣生長(zhǎng)特性 懸浮生長(zhǎng)特征特性  該細(xì)胞來(lái)源于一正常男性的外周血。1998年由中國(guó)科學(xué)院昆明細(xì)胞庫(kù)通過(guò)EB病毒轉(zhuǎn)化的方法建立。 培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  15%NBS

CD276|B7-H3|B7H3|B7 homolog 3|CD276 antigen|CD276 molecule|Costimulatory molecule形態(tài)特性  淋巴母細(xì)胞樣生長(zhǎng)特性 懸浮生長(zhǎng)特征特性  該細(xì)胞來(lái)源于一正常男性的外周血。1998年由中國(guó)科學(xué)院昆明細(xì)胞庫(kù)通過(guò)EB病毒轉(zhuǎn)化的方法建立。 培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  15%NBS

CTSV|Cathepsin V|CTSL2|CATL2|CTSU|Cathepsin L2|Cathepsin U|cathepsin L2|preproprotein形態(tài)特性  淋巴母細(xì)胞樣生長(zhǎng)特性 懸浮生長(zhǎng)特征特性  該細(xì)胞來(lái)源于一正常男性的外周血。2005年由中國(guó)科學(xué)院昆明細(xì)胞庫(kù)通過(guò)EB病毒轉(zhuǎn)化的方法建立。 培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  15%NBS

TNFRSF8|CD30|CD30 antigen|KI-1|CD30L receptor|cytokine receptor CD30|Ki-1 antigen|Lymphocyte activation antigen CD30|tumor necrosis factor receptor superfamily member 8形態(tài)特性  淋巴母細(xì)胞樣生長(zhǎng)特性 懸浮生長(zhǎng)特征特性  該細(xì)胞系來(lái)源于一男性的外周血。2007年由中國(guó)科學(xué)院昆明細(xì)胞庫(kù)通過(guò)EB病毒轉(zhuǎn)化的方法建立。 培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  15%NBS