參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)品名稱：轉(zhuǎn)基因品系大豆DP356043探針法qPCR試劑盒
貨號(hào):CP96960
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
運(yùn)輸：低溫
注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

實(shí)驗(yàn)方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
使用方法:
一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，*用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 陽性對(duì)照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產(chǎn)品跟市場(chǎng)上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8. 如果有 N 個(gè)樣品，則需要進(jìn)行 N+2 個(gè)樣品提取，多出的一個(gè)用作樣品制備陽性對(duì)照管、另一個(gè)用作樣品制備陰性對(duì)照管。
三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照（用水做模板），6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照（用水做模板），1 個(gè)用于PCR 陽性對(duì)照。
PCR檢測(cè)方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
(2)待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測(cè)目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測(cè)的可靠性。
步驟(2)為：待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
其中所述待測(cè)目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測(cè)目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。

以下是轉(zhuǎn)基因品系大豆DP356043探針法qPCR試劑盒公司正在熱銷的產(chǎn)品：
Human IL2RG(Cytokine receptor common subunit gamma) ELISA Kit資源名稱掌狀擬盤多毛孢種屬:Pestalotiopsis│palmarum提供形式:斜面培養(yǎng)物

Human IRAK3(Interleukin-1 receptor-associated kinase 3) ELISA Kit資源名稱膝曲彎孢種屬:Curvularia│geniculata提供形式:斜面培養(yǎng)物

Human COMT(Catechol O-methyltransferase) ELISA Kit資源名稱稻梨孢（稻瘟病菌）種屬:Pyricularia│oryzae提供形式:斜面培養(yǎng)物

Human DHFR(Dihydrofolate reductase) ELISA Kit資源名稱稻梨孢（稻瘟病菌）（不提供）種屬:Pyricularia│oryzae提供形式:斜面培養(yǎng)物

Human IFNA10(Interferon alpha-10) ELISA Kit資源名稱熱帶金孢種屬:Chrysosporium│tropicum提供形式:斜面培養(yǎng)物

Human IFNA8(Interferon alpha-8) ELISA Kit資源名稱環(huán)鏈棒束孢種屬:Isaria│cateniannulata提供形式:斜面培養(yǎng)物

Human S100A10(Protein S100-A10) ELISA Kit資源名稱斜鏈棒束孢種屬:Isaria│cateniobliqua提供形式:斜面培養(yǎng)物

Human PRNP(Major prion protein) ELISA Kit資源名稱粉質(zhì)棒束孢種屬:Isaria│farinosa提供形式:斜面培養(yǎng)物

Human STAT5B(Signal transducer and activator of transcription 5B) ELISA Kit資源名稱間型彎孢種屬:Curvularia│intermedia提供形式:斜面培養(yǎng)物

Human FZD4(Frizzled-4) ELISA Kit資源名稱黑細(xì)基格孢種屬:Ulocladium│atrum提供形式:斜面培養(yǎng)物

Human UBQLN1(Ubiquilin-1) ELISA Kit資源名稱尖鐮孢古巴?；停ㄏ憬犊菸【┓N屬:Fusarium│oxysporum f. sp. cubense提供形式:斜面培養(yǎng)物

Human NFKB2(Nuclear factor NF-kappa-B p100 subunit) ELISA Kit資源名稱葡萄座腔菌（蘋果干腐病菌）種屬:Botryosphaeria│dothidea提供形式:斜面培養(yǎng)物

Human APOC4(Apolipoprotein C-IV) ELISA Kit資源名稱顆粒墊殼孢（石榴干腐病菌）種屬:Coniella│granati提供形式:斜面培養(yǎng)物

Human CCDC82(Coiled-coil domain-containing protein 82) ELISA Kit資源名稱灰色產(chǎn)色鏈霉菌種屬:Streptomyces│griseochromogenes分離基物:土壤

Human HMGN1(Non-histone chromosomal protein HMG-14) ELISA Kit資源名稱小金色鏈霉菌種屬:Streptomyces│microaureus分離基物:土壤

Human IGIP(IgA-inducing protein homolog) ELISA Kit資源名稱密蘇里游動(dòng)放線菌種屬:Actinoplanes│missourieneis分離基物:土壤表層5-10cm處

Human STS(Steryl-sulfatase) ELISA Kit資源名稱微白黃鏈霉菌種屬:Streptomyces│albidoflavus提供形式:斜面培養(yǎng)物

Human S100A2(Protein S100-A2) ELISA Kit資源名稱黃質(zhì)產(chǎn)色鏈霉菌種屬:Streptomyces│xanthochromogenes分離基物:土壤

Human CCT8L1P(Putative T-complex protein 1 subunit theta-like 1) ELISA Kit資源名稱婁徹氏鏈霉菌種屬:Streptomyces│rochei分離基物:土壤

Human HMMR(Hyaluronan mediated motility receptor) ELISA Kit資源名稱韋臘鏈霉菌種屬:Streptomyces│werraensis分離基物:土壤
轉(zhuǎn)基因品系大豆DP356043探針法qPCR試劑盒OxLDL(Oxidized low-density lipoprotein)形態(tài)特性  上皮樣細(xì)胞生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)特征特性   培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%

NRN1|NRN(Neuritin)|neuritin 1形態(tài)特性  上皮樣；圓形、成團(tuán)　生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)特征特性  該細(xì)胞系由Lasfargues E和 Coutinho WG建立，源于一名60歲患有浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌的白人女性的實(shí)體瘤。 培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  新生牛血清，10%；10ug/ml 人重組insulin

MYOCD|MYCD(Myocardin)|BSAC2A|MYCD|MYOCD|Srfcp|形態(tài)特性  淋巴母細(xì)胞樣生長(zhǎng)特性 懸浮生長(zhǎng)特征特性  HTLV-1感染 培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  新生牛血清，10%

MITF|BHLHE32(Microphthalmia-associated transcription factor)|MI|WS2A|Waardenburg syndrome|type 2A|Class E basic helix-loop-helix protein 32形態(tài)特性  骨髓瘤細(xì)胞樣生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)特征特性   培養(yǎng)條件  IMDM: Iscove's Modiefied Dulbecco's Medium  新生牛血清，20%

MDH2(Malate dehydrogenase|mitochondrial)形態(tài)特性  上皮樣生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)特征特性   培養(yǎng)條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  10% FBS

LMAN2|C5orf8|VIP36|Vesicular integral-membrane protein 36|Glycoprotein GP36b|Lectin mannose-binding 2形態(tài)特性  淋巴母細(xì)胞樣生長(zhǎng)特性 懸浮生長(zhǎng)特征特性  不分泌免疫球蛋白,HAT敏感. 培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  新生牛血清，10%

GDF5|BMP-14|CDMP-1|BMP14|Cartilage-derived morphogenetic protein 1|cartilage-derived morphogenetic protein-1|CDMP1LAP4|GDF-5|growth differentiation factor 5|growth|differentiation factor 5|OS5|Radotermin|radotermin|SYNS2形態(tài)特性  上皮樣細(xì)胞生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)特征特性  這株細(xì)胞來源于一個(gè)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。 患者接受了初期放療。 細(xì)胞均一性的部分缺失p53蛋白，并缺少p53蛋白表達(dá)。 細(xì)胞可以合成0.1pmol/毫克蛋白的NMB蛋白，而不合成促胃液釋放肽(GRP)。 培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%

MMP-17|MMP17|MT4-MMP|matrix metallopeptidase 17(membrane-inserted)|matrix metalloproteinase-17|membrane-type matrix metalloproteinase 4|membrane-type-4 matrix metalloproteinase|MT4MMP|MT-MMP 4|MTMMP4形態(tài)特性  淋巴母細(xì)胞樣生長(zhǎng)特性 懸浮生長(zhǎng)特征特性  該細(xì)胞來源于一位3歲的白人Burkitt淋巴瘤患者；EBV陰性；表達(dá)IL-4受體和低親和性IgE受體（CD23）；每個(gè)細(xì)胞表面大約有1500個(gè)IL-4的結(jié)合位點(diǎn)；分泌IgM（lamda L）；表達(dá)膜型和分泌型的免疫球蛋白。 培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS