使用方法:
一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。
1. 標(biāo)記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，*用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8. 如果有 N 個樣品，則需要進行 N+2 個樣品提取，多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。
三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20μL 體系，在樣品制備室進行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+9 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），6 個用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+4 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），1 個用于PCR 陽性對照。
參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)品名稱：轉(zhuǎn)基因品系棉花WideStrike PCR試劑盒
貨號:CP97114
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品運輸：低溫運輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
運輸：低溫
注意事項：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

PCR檢測方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
(2)待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
其中所述參照基因為本領(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。
步驟(2)為：待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中所述待測目的基因為本領(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
?實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

以下是轉(zhuǎn)基因品系棉花WideStrike PCR試劑盒公司正在熱銷的產(chǎn)品：
anti- ASZ1 antibody資源名稱Sphingobiumjaponicum種屬:Sphingobiumjaponicum分離基物:菌株SS86的萘啶酸抗性突變株，山地實驗田安全等級:1模式菌株:yes應(yīng)用領(lǐng)域:模式菌株:培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:109或110生長條件:28℃

anti- ATAD1 antibody資源名稱Sphingobiumrhizovicinum種屬:Sphingobiumrhizovicinum分離基物:山橘的根際土壤，中國臺灣安全等級:1模式菌株:yes應(yīng)用領(lǐng)域:模式菌株:培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:108或109生長條件:28℃

anti- ATAD2 antibody資源名稱長赤細菌種屬:Erythrobacterlongus分離基物:海藻,日本安全等級:1模式菌株:yes應(yīng)用領(lǐng)域:模式菌株:，產(chǎn)生細菌葉綠素培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:102、134生長條件:37℃

anti- ATAD5 antibody資源名稱海洋鹽單胞菌種屬:Cobetiamarina=HalomonASmarina分離基物:海水安全等級:1模式菌株:yes應(yīng)用領(lǐng)域:模式菌株:培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:102生長條件:26℃

anti- Ataxin 2 antibody資源名稱Georgeniamuralis種屬:Georgeniamuralis分離基物:中世紀(jì)的壁畫，奧地利安全等級:1模式菌株:yes應(yīng)用領(lǐng)域:模式菌株:培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:108生長條件:28℃

anti- ATE1 antibody資源名稱善變副球菌種屬:Paracoccus│versutus分離基物:油田水樣提供形式:凍干物安全等級:1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:微生物采油培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:2

anti- ATF1 antibody資源名稱耐鹽芽孢桿菌種屬:Bacillushalodurans分離基物:土壤，日本安全等級:1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:產(chǎn)β-半乳糖苷酶和木聚糖酶培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:126生長條件:30℃

anti- ATF2 antibody資源名稱德氏乳桿菌乳酸亞種（萊氏曼氏乳桿菌）種屬:Lactobacillusdelbrueckiisubsp.lactis＝Lactobacillusleichmannii安全等級:1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:維生素B12（氰鈷胺素）檢測培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:58或106生長條件:37℃

anti- ATF2-Specific antibody資源名稱斯氏李斯特氏菌種屬:Listeria seeligeri提供形式:凍干粉安全等級:1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:研究、質(zhì)量控制培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:腦心浸液瓊脂（BHIA）：牛腦浸粉 4.0g，牛心浸粉 4.0g，蛋白胨 5.0g，酪蛋白胨16.0g，NaCl 5.0g，葡萄糖 2.0g，磷酸氫二鈉 2.5g，瓊脂 20.0g，pH7.4 ± 0.2。121℃，15min。生長條件:37℃，好氧

anti- ATF4 antibody資源名稱乳酸乳球菌乳亞種種屬:Lactococcus lactis subsp. lactis提供形式:凍干物安全等級:1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:Produces nisin培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:MRS培養(yǎng)基:酪胨 10.0g，牛肉粉 8.0g，酵母粉 4.0 g，葡萄糖 20.0 g，硫酸鎂 0.2 g，乙酸鈉 5.0 g，檸檬酸三銨 2.0 g，磷酸氫二鉀 2.0 g，硫酸錳 0.05 g，吐溫80 1.0 g，蒸餾水 1000mL。pH6.2±0.2。121℃，15min。生長條件:37℃，微好氧

anti- ATF4 antibody資源名稱Chryseobacteriumjeonii種屬:Chryseobacteriumjeonii分離基物:企鵝棲息地的蘚類安全等級:1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:109生長條件:15℃

anti- ATF6 antibody資源名稱菩提奇異球菌種屬:Deinococcusficus＝Deinococcusmumbaiensis分離基物:受污染的營養(yǎng)平板，印度安全等級:1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:108生長條件:28℃

anti- ATF6B antibody資源名稱拜氏梭菌種屬:Clostridium beijerinckii提供形式:凍干物安全等級:1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:研究、質(zhì)量控制培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基:酪蛋白胨 15.0g，酵母浸出粉5.0g，葡萄糖5.0g，硫乙醇酸鈉0.5g，L-胱氨酸0.5g，刃天青0.001g，氯化2.5g，pH7.1-7.3生長條件:37℃，厭氧

anti- ATG12 antibody資源名稱干燥棒桿菌種屬:Corynebacteriumxerosis分離基物:小孩耳朵排泄物安全等級:1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:114生長條件:37℃

anti- ATG12 antibody資源名稱屎腸球菌(屎鏈球菌)種屬:Enterococcusfaecium=Streptococcusfaecium安全等級:1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:124生長條件:37℃

anti- ATG13 antibody資源名稱屎腸球菌種屬:Enterococcus faecium提供形式:凍干粉安全等級:1模式菌株:yes應(yīng)用領(lǐng)域:模式菌株:培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:MRS培養(yǎng)基:酪胨 10.0g，牛肉粉 8.0g，酵母粉 4.0 g，葡萄糖 20.0 g，硫酸鎂 0.2 g，乙酸鈉 5.0 g，檸檬酸三銨 2.0 g，磷酸氫二鉀 2.0 g，硫酸錳 0.05 g，吐溫80 1.0 g，蒸餾水 1000mL。pH6.2±0.2。121℃，15min。生長條件:37℃，微好氧

anti- ATG16L1 antibody資源名稱具核梭桿菌多形亞種種屬:Fusobacteriumnucleatumsubsp.polymorphum分離基物:牙齦發(fā)炎，成年男性安全等級:1模式菌株:yes應(yīng)用領(lǐng)域:模式菌株:培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:35、122，厭氧生長條件:37℃

anti- ATG16L2 antibody資源名稱脆弱擬桿菌種屬:Bacteroides fragilis分離基物:闌尾膿腫提供形式:凍干管，斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:yes應(yīng)用領(lǐng)域:模式菌株:。質(zhì)量控制、藥敏試驗菌株培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:TSA＋5%脫纖維羊血
轉(zhuǎn)基因品系棉花WideStrike PCR試劑盒小鼠 NRG3 Chicken CP(Ceruloplasmin) ELISA Kit9.375ng/ml15.625-1000ng/ml

小鼠 NRG2 Chicken IgA(Immunoglobulin A) ELISA Kit0.094ng/ml0.156-10ng/ml

小鼠 NRG1 Chicken FGA(Fibrinogen Alpha) ELISA Kit0.938ng/ml1.563-100ng/ml

小鼠 ENA-78 Chicken IgM(Immunoglobulin M) ELISA Kit0.094ng/ml0.156-10ng/ml

小鼠 SDH Chicken LZM(Lysozyme LZM) ELISA Kit0.375ng/ml0.625-40ng/ml

小鼠anti-Chlamydia trachomatis(CT)-IgG Chicken SAA(serum amyloid A) ELISA Kit0.094ng/ml0.156-10ng/ml

小鼠Killer cell lectin-like receptor subfamily B member 1C(Klrb1c/Ly55c/Nkrp1c)Chicken a1AGP(Alpha-1-Acid Glycoprotein) ELISA Kit0.094ng/ml0.156-10ng/ml