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上海研生實(shí)業(yè)有限公司
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當(dāng)前位置:上海研生實(shí)業(yè)有限公司>>PCR類>>DNA提取試劑盒>> 50次T7體外轉(zhuǎn)錄試劑盒

T7體外轉(zhuǎn)錄試劑盒

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產(chǎn)品型號(hào)50次

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所  在  地上海市

更新時(shí)間:2021-11-19 15:34:24瀏覽次數(shù):388次

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規(guī)格 50次 貨號(hào) YS-P013270
品牌 YSRIBIO
T7體外轉(zhuǎn)錄試劑盒原理是由一對(duì)引物介導(dǎo),能在動(dòng)植物體外對(duì)特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,經(jīng)過(guò)n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,使得檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。

組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)

2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。

3、 樣品稀釋液:1×20ml。

4、 檢測(cè)稀釋液A:1×10ml。

5、 檢測(cè)稀釋液B:1×10ml。
服務(wù)流程:

公司產(chǎn)品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

貨號(hào)

T7體外轉(zhuǎn)錄試劑盒

50次

YS-P013270

PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

循環(huán)步驟

溫度

時(shí)間

循環(huán)數(shù)

預(yù)變性

94℃

5   min

1

變性

94℃

10   sec

30-40

退火

50-65℃

20   sec

30-40

延伸

72℃

30   sec/kb

30-40

終延伸

72℃

5   min

1

 

QQ截圖20191211135002.jpg 

PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:

①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;

②堿基配對(duì)原則;

③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;

④靶基因的特異性與保守性。

其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過(guò)選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。

(2) 靈敏度高

PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬(wàn)個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞;在病毒的檢測(cè)中,PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)細(xì)菌。

(3) 簡(jiǎn)便、快速

PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無(wú)放射性污染、易推廣。

(4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低

不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。

反應(yīng)五要素:

參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:

①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。

②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。

③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。

⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。

⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列最好有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。

⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。

引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。

人肝配蛋白A3 (EFNA3)炔雌ADP核糖基化因子結(jié)合蛋白2抗體

人磷脂酶D2(PLD2)乙硫異煙,硫異煙精氨酸加壓素受體2抗體

人吡啶酚(PYD)乙硫異煙,硫異煙(標(biāo)準(zhǔn)品)凋亡相關(guān)斑點(diǎn)樣蛋白ASC抗體

人吡哆激酶(PDXK) 依曲韋林絲狀肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白抗體

人酮酸脫氫酶β(PDHβ)法莫替丁抗凝血酶3抗體

人密封蛋白(OCLN)法莫替丁(標(biāo)準(zhǔn)品)人血清白蛋白單克隆抗體

人信號(hào)素7A(SEMA7A)非布索坦載脂蛋白A4抗體

人質(zhì)膜膜泡關(guān)聯(lián)蛋白 (PLVAP)非布索坦(標(biāo)準(zhǔn)品)磷酸化Rho鳥(niǎo)苷酸交換因子2抗體

人間羥腎上腺素(MN) 非那西丁磷酸化絲狀肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白抗體

人胰島素樣生長(zhǎng)因子1受體3(IGF1R3)非那西丁(標(biāo)準(zhǔn)品)肌動(dòng)蛋白相關(guān)蛋白2/3亞型1A抗體

人羥酰谷胱甘肽水解酶(HAGH)鹽酸芬戈莫德錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白32抗體

人表面活性物質(zhì)關(guān)聯(lián)蛋白J(SPJ)鹽酸芬戈莫德(標(biāo)準(zhǔn)品)共濟(jì)失調(diào)7樣蛋白3B抗體

人表面膜免疫球蛋白A(mIgA)氟芬那酸,氟滅酸感染性蛋白蛋白1抗體

人表面膜免疫球蛋白D(mIgD) 氟芬那酸,氟滅酸(標(biāo)準(zhǔn)品)含錨蛋白重復(fù)序列-因子信號(hào)抑制物盒蛋白家族5抗體

人表面膜免疫球蛋白M(mIgM) 氟馬西尼/氟馬澤尼植物生長(zhǎng)激素ABP1抗體

人表皮角蛋白(EK)  氟馬西尼/氟馬澤尼(標(biāo)準(zhǔn)品)磷酸化活化復(fù)制因子2抗體
T7體外轉(zhuǎn)錄試劑盒CCL19/MIP-3 beta  巨噬炎性蛋白19抗體全氟辛酸 分析標(biāo)準(zhǔn)品, 用于環(huán)境分析

CCL26/Eotaxin 3  嗜酸粒趨化蛋白3抗體2,4,6-三磺酸 5 % (w/v) 水溶液

CCL27/CTACK  皮膚T虜獲趨化因子抗體2-基硫 96%

Dectin-1/CLECSF12  C型凝集素結(jié)構(gòu)域家族7成員A姥鮫烷 98%

CCR-1  表面趨化因子受體1抗體4-(1-吡咯烷)苯甲 97%

Dectin-2  C型凝集素結(jié)構(gòu)域家族6成員A抗體聚苯乙烯,1000 分析標(biāo)準(zhǔn)品

CCR-2/5/CD192  表面趨化因子受體2/5抗體聚(4-苯乙烯磺酸-共聚-馬來(lái)酸)鈉鹽 摩爾比率3:1

CCR-2A  表面趨化因子受體2A抗體聚(4-苯乙烯磺酸-共聚-馬來(lái)酸)鈉鹽 摩爾比率1:1


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