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可調(diào)式易錯PCR試劑盒

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產(chǎn)品型號100次

品       牌其他品牌

廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

所  在  地上海市

更新時間:2021-11-19 15:36:35瀏覽次數(shù):363次

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規(guī)格 100次 貨號 YS-P013268
品牌 YSRIBIO
可調(diào)式易錯PCR試劑盒原理是由一對引物介導(dǎo),能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,經(jīng)過n個熱循環(huán)擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,使得檢測擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。

服務(wù)流程:

公司產(chǎn)品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

貨號

可調(diào)式易錯PCR試劑盒

100次

YS-P013268

PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

循環(huán)步驟

溫度

時間

循環(huán)數(shù)

預(yù)變性

94℃

5   min

1

變性

94℃

10   sec

30-40

退火

50-65℃

20   sec

30-40

延伸

72℃

30   sec/kb

30-40

終延伸

72℃

5   min

1

組成及試劑配制:

1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)

2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。

3、 樣品稀釋液:1×20ml。

4、 檢測稀釋液A:1×10ml。

5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
QQ截圖20191211135002.jpg

PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:

①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;

②堿基配對原則;

③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;

④靶基因的特異性與保守性。

其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。

(2) 靈敏度高

PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達(dá)3個RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個細(xì)菌。

(3) 簡便、快速

PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。

(4) 對標(biāo)本的純度要求低

不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。

人白介素2受體β(IL-2Rβ)卡比多巴(標(biāo)準(zhǔn)品)ATP結(jié)合蛋白家族5抗體

人白介素3介導(dǎo)核因子(NFIL3)醋酸氯地孕酮(標(biāo)準(zhǔn)品)N-甲基嘌呤DNA糖基化酶

人白三烯C4(LTC4)醋酸氯地孕酮AU5 tag標(biāo)簽抗體

人白三烯D4(LTD4)鹽酸環(huán)沙星鈣離子ATP酶通道蛋白抗體

人白三烯E4(LTE4) 鹽酸環(huán)沙星(標(biāo)準(zhǔn)品)果桃α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶抗體

人白彈性蛋白酶(HLE) 順苯磺阿曲庫銨脂肪炎癥因子Apelin抗體

人白調(diào)節(jié)素(LR) 醋酸可氫ATP酶通道蛋白抗體

人白共同抗原(LCA/CD45)醋酸可(標(biāo)準(zhǔn)品)ATP5A抗體

人白免疫球蛋白樣受體亞家族B成員4(LILRB4)丹曲林鈉即刻早期基因ARC抗體

人白血病抑制因子受體(LIFR)丹曲林鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)ADP核糖基化因子6抗體

人甘氨酰tRNA合成酶(GARS)  D-泛酸鈣,維生素B5芳香化酶抗體

人肝配蛋白A受體1 (EPHA1)脫羧氯雷他定/地氯雷他定Artemin抗體

人斑型POZ蛋白(SPOP)脫羧氯雷他定/地氯雷他定(標(biāo)準(zhǔn)品)alpha 1腎上腺素能受體A抗體

人血小板膜糖蛋白IV (GP4/CD36)地塞米松磷酸鈉血管緊張素Ⅱ-1型受體抗體

人神經(jīng)特異性烯化酶(NSE)地塞米松磷酸鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)活化轉(zhuǎn)錄因子3抗體

IV D組磷脂酶A2(PLA2G4D)磷酸奧司他韋血管緊縮素樣蛋白1抗體
可調(diào)式易錯PCR試劑盒CCL1/TCA3/I-309  嗜酸粒趨化蛋白CCL1抗體聚(甲基乙烯基共聚馬來酸) Mw ~216,000 to ~80,000, powder

CCL3/MIP-1 Alpha  巨噬炎性蛋白1α抗體四苯 99%

CCL4/MIP-1 Beta  巨噬炎性蛋白1β抗體軟脂酸 分析標(biāo)準(zhǔn)品,>99%(GC)

CCL5/RANTES  T特異性趨化因子抗體苯基三氯化錫 分析標(biāo)準(zhǔn)品

CCL6/C10  嗜酸粒趨化蛋白CCL6抗體苯基三氯化錫 98%

CCL11/Eotaxin 1  嗜酸粒趨化蛋白抗體二甲基二烯基氯化銨/烯酰共聚物 10 wt. % in H2O

CCL12/MCP5  單核趨化蛋白5抗體對位紅 分析標(biāo)準(zhǔn)品,用于食品分析

CCL13/MCP-4  單核趨化蛋白4抗體巖芹酸 分析標(biāo)準(zhǔn)品,>99%(GC)
反應(yīng)五要素:

參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:

①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。

②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。

③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機(jī)分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。

⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。

⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列最好有適宜的酶切位點(diǎn), 這對酶切分析或分子克隆很有好處。

⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。

引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。

 


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