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上海谷研實(shí)業(yè)有限公司
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丙酮酸激酶(PK)紫外分光光度法檢測(cè)試劑盒

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更新時(shí)間:2022-04-27 10:27:32瀏覽次數(shù):210次

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elisa檢測(cè)試劑盒
ATCC細(xì)胞
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國(guó)產(chǎn)貨號(hào) GOY-01S6604
丙酮酸激酶(PK)紫外分光光度法檢測(cè)試劑盒公司正在出售的產(chǎn)品:TSH-BETA蛋白表達(dá)西方雜交分析試劑盒 5次
TSH-BETA蛋白免疫共沉淀分析試劑盒 5次
TSH-BETA蛋白表達(dá)ELISA定量檢測(cè)試劑盒 25次
細(xì)胞IL蛋白表達(dá)流式細(xì)胞儀檢測(cè)試劑盒 10/20次
載玻細(xì)胞IL蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒 10/20次
冰凍切組織IL蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒 10/20次
石蠟

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產(chǎn)品名稱

規(guī)格

檢測(cè)方法

貨號(hào)

丙酮酸激酶(PK)紫外分光光度法檢測(cè)試劑盒

50管/48樣

紫外分光光度法

GOY-01S6604

商品介紹

測(cè)定意義

PKEC 2.7.1.40)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,催化糖酵解過程中的最后一步反應(yīng),是糖酵解過程中的主要限速酶之一,也是產(chǎn)生ATP的關(guān)鍵酶之一,因此測(cè)定PK活性具有重要意義。

測(cè)定原理

PK催化磷酸烯醇式丙酮酸和ADP生成ATP和丙酮酸,乳酸脫氫酶進(jìn)一步催化NADH和丙酮酸生成乳酸和NAD+,在340nm下測(cè)定NADH下降速率,即可反映PK活性。

需自備的儀器和用品

紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水

試劑的組成和配制:

提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;

試劑一:液體 5mL×1 瓶,4℃保存;

試劑二:液體 200μL×1 支,4℃保存;

試劑三:液體 4mL×1 瓶,4℃保存;

試劑四:粉劑×2 瓶,4℃保存。
QQ截圖20220307153443.png

所需的儀器和用品:

可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水

四、超氧化物歧化酶(SOD)的測(cè)定:

建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn)

樣本和試劑浪費(fèi)!

1、樣本制備

① 組織樣本:

取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進(jìn)行

勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測(cè)液。

【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進(jìn)行提取

② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本:

先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL

提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);

12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。

【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10

4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測(cè);若渾濁,離心后取上清檢測(cè)。

注意事項(xiàng):

1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時(shí)在冰上放置。

2、對(duì)照管只需要做一管。

3、若對(duì)照管吸光值大于 1,建議將試劑二用蒸餾水稀釋 7 倍后使用(10μL 試劑二原液+60μL蒸餾水)。

4、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管,對(duì)照管數(shù)值在什么范圍?對(duì)照管的范圍是 0.4-1。對(duì)照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用;

2)沒有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時(shí)間不夠,可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間(反應(yīng)時(shí)間 30min可以延長(zhǎng)到 40min)。對(duì)照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。

若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般

將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋 10倍后再測(cè),通??梢允箿y(cè)定正常。

氟酸鋅 CPp, p’-DDD標(biāo)準(zhǔn)溶液100μg/ml,u=2%,溶劑:石油Anti-BRAF/FITC  熒光素標(biāo)記黑素瘤相關(guān)蛋白抗體IgG

硝酸鋅,六水 AR,99%p, p’-DDD標(biāo)準(zhǔn)溶液10μg/ml,u=7%,溶劑:石油Anti-B Raf(phospho S365) /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠化B-Raf抗體IgG

硝酸鋅,六水 CP,98%o,p’-DDT標(biāo)準(zhǔn)溶液100μg/ml,溶劑:甲Anti-phospho-B-Raf (Ser445)/FITC  熒光素標(biāo)記化B-Raf抗體IgG

硝酸鋅,六水 99.99% metals basiso,p’-DDT標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml,u=2%Anti-phospho-B-Raf (Ser601) /FITC  熒光素標(biāo)記化B-Raf抗體IgG

氧化鋅 99.999% metals basiso,p’-DDT標(biāo)準(zhǔn)溶液 10μg/ml,u=4%Anti-BRCA1(human)/FITC  熒光素標(biāo)記癌易感基因1抗體(人)IgG

氧化鋅 藥典級(jí)(Ph. Eur., BP, USP, 99-100.5%)乙苯標(biāo)準(zhǔn)溶液1000ppm,基質(zhì):甲Anti-BRCA1(mouse rat)/FITC  熒光素標(biāo)記癌易感基因1抗體(小鼠 大鼠)IgG

,七水 AR,99.5%異標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml,溶劑:甲(劇品)Anti-BRCA1(Phospho Ser1524) /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠化癌易感基因1抗體IgG

,七水  99.995% metals basis乙苯標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/ml,溶劑:二硫化碳Anti-BRCA2/FITC  熒光素標(biāo)記癌易感基因2抗體IgG

丙酮酸激酶(PK)紫外分光光度法檢測(cè)試劑盒Anti-S6PDH/FITC  熒光素標(biāo)記抗6-山梨脫氫抗體IgG綿羊接觸蛋白4(CNTN4)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

Anti-SAMDC/AMD1/FITC  熒光素標(biāo)記S-腺苷蛋氨脫羧抗體IgG綿羊(LZM)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

Anti-SARS S-protein/FITC  熒光素標(biāo)記非典病表面蛋白S抗體IgG綿羊衰老關(guān)鍵蛋白5(FBLN5)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

Anti-SARS putative orflab polyprotein/FITC  熒光素標(biāo)記SARS抗體IgG綿羊白分化抗原CD4(CD4)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

Anti-SATB1/FITC  熒光素標(biāo)記核質(zhì)結(jié)合區(qū)結(jié)合蛋白1抗體IgG綿羊抗白蛋白抗體(AAA)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒  

Anti-Phospho-SATB1 (Ser47)/FITC  熒光素標(biāo)記化核質(zhì)結(jié)合區(qū)結(jié)合蛋白1抗體IgG綿羊平滑肌肌動(dòng)蛋白α2(ACTα2)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

Anti-SCF/FITC  熒光素標(biāo)記干生長(zhǎng)因子抗體IgG綿羊間羥素(MN)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

Anti-SCG3/SgIII /FITC  熒光素標(biāo)記分泌粒蛋白Ⅲ抗體IgG綿羊表睪酮(ET)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

Anti-SCN1A/FITC  熒光素標(biāo)記電壓閥門鈉通道蛋白a1/癲癇相關(guān)蛋白抗體IgG綿羊生長(zhǎng)分化因子11(GDF11)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

Anti-SCN2A/FITC  熒光素標(biāo)記電壓閥門鈉通道蛋白a2/癲癇相關(guān)蛋白抗體IgG綿羊糖皮質(zhì)激素受體α(GRα)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

Anti-SCN9A/NAV1.7/FITC  熒光素標(biāo)記電壓開啟的鈉離子通道SCN9AIgG綿羊纖溶原激活物抑制因子1(PAI1)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

Anti-SCP2/NLTP/FITC  熒光素標(biāo)記固攜帶蛋白2抗體IgG綿羊多巴受體D4(D4R/DRD4)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

Anti-SCP3/FITC  熒光素標(biāo)記聯(lián)會(huì)復(fù)合體蛋白3抗體IgG綿羊染色盒同源物3(CBX3)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

Anti-Secretin/FITC  熒光素標(biāo)記分泌素抗體IgG綿羊半糖苷β(GLβ)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

Anti-Secretin receptor/FITC  熒光素標(biāo)記分泌素受體抗體IgG綿羊Toll樣受體9(TLR9/CD289)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

測(cè)定步驟:

1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至450nm。

2、 試劑三的稀釋:將試劑三用蒸餾水稀釋50倍,用多少配多少。(試劑三和蒸餾水1:49稀釋。

3、 工作液配制:在試劑一加入100μl試劑二,充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。(若一次性測(cè)定樣本較少,可按照實(shí)際用量將試劑一和試劑二按照20ml:0.1ml的比例混勻配制)

4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解(溶解后一周內(nèi)用完)。

5、 樣本測(cè)定(在96孔板中依次加入下列試劑)

選擇抗凝的注意點(diǎn):

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;

②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;

③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);

④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后用于測(cè)定。

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