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當(dāng)前位置:上海谷研實(shí)業(yè)有限公司>>生化檢測試劑盒>>氨基酸代謝系列>> 吡咯啉5羧酸合成酶(P5CS)微量法
貨號(hào) | GOY-01S6526 |
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商品屬性:
產(chǎn)品名稱 | |
規(guī)格 | 100管/48樣 |
檢測方法 | 微量法 |
貨號(hào) | GOY-01S6526 |
商品介紹:
測定意義
是植物體內(nèi)適應(yīng)逆境脅迫的一種重要的滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)。高等植物中代謝因其初始底物不同,分為( Glu) 和( Orn) 兩條合成途徑。吡咯啉-5-羧酸合成酶(P5CS, Δ1-pyrroline-5-carboxylate synthetase)是以為前體合成途徑的關(guān)鍵酶,對(duì)植物適應(yīng)逆境脅迫起關(guān)鍵作用。
測定原理:
吡咯啉-5-羧酸合成酶催化生成P5C過程中分解ATP生成ADP和無機(jī)磷,通過鉬酸銨比色法測定單位時(shí)間內(nèi)產(chǎn)生無機(jī)磷的量可確定P5CS活性。
需自備的儀器和用品:
可見外分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
實(shí)驗(yàn)方法學(xué):
一、肝素的配制: 市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?/span>0.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。 肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。 | 二、血液樣本的收集: 全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。 1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。 2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA。 |
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測定。
Boc-L-天冬1-芐酯 98%三氯硅烷 99%Anti-Sema6A/FITC 熒光素標(biāo)記抗Sema6A抗體IgG
Boc-L- 98%乙基苯 Standard for GC,≥99.5%(GC)Anti-Sema7A/CD108/FITC 熒光素標(biāo)記軸突生長因子CD108抗體IgG
BOC-D-纈 98%乙基苯 99.8%,無水級(jí)Anti-sFRP/FITC 熒光素標(biāo)記抗內(nèi)膜抗體IgG
BOC-L-羥脯甲酯 98%乙基苯 AR,98.5% Anti-SFRP1/FITC 熒光素標(biāo)記分泌型卷曲相關(guān)蛋白1抗體IgG
BOC-L-苯甘 98%乙苯標(biāo)準(zhǔn)溶液1000ppm,基質(zhì):甲Anti-SGC/FITC 熒光素標(biāo)記可溶性糖蛋白C抗體IgG
BOC-D-天冬酰 98%乙基苯 >99.5%(GC)Anti-SGLT1 /FITC 熒光素標(biāo)記鈉-葡萄糖共轉(zhuǎn)運(yùn)載體1抗體IgG
BOC-L-苯甘氨 98%乙基苯 分析標(biāo)準(zhǔn)品Anti-SGK1/FITC 熒光素標(biāo)記糖皮質(zhì)調(diào)節(jié)激1抗體IgG
苯甲氧羰酰琥珀酰亞 98%間二甲苯 Standard for GC, ≥99.5% (GC)Anti-Phospho-SGK1 (Ser78)/FITC 熒光素標(biāo)記化糖皮質(zhì)調(diào)節(jié)激1抗體IgG
吡咯啉5羧酸合成酶(P5CS)微量法檢測試劑盒Anti-TACR3/NK-3 receptor /FITC 熒光素標(biāo)記速激肽受體3抗體IgG綿羊組織因子途徑抑制因子2(TFPI2)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
Anti-TAK1/FITC 熒光素標(biāo)記轉(zhuǎn)化生長因子β活化激1抗體IgG綿羊二氫嘧樣2(DPYSL2)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
Anti-Phospho-TAK1 (Ser412)/FITC 熒光素標(biāo)記化轉(zhuǎn)化生長因子β活化激1抗體IgG綿羊免疫球蛋白G Fc段低親和力受體IIIb(FcγR3B)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
Anti-Phospho-TAK1 (Thr184)/FITC 熒光素標(biāo)記化轉(zhuǎn)化生長因子β活化激1抗體IgG綿羊免疫球蛋白G Fc段受體II(FcγR II/CD32)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
Anti-Phospho-TAK1 (Thr187)/FITC 熒光素標(biāo)記化轉(zhuǎn)化生長因子β活化激1抗體IgG綿羊相關(guān)血漿蛋白2(PAPPA2)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
Anti-Phospho-TAK1 (Thr184/187)/FITC 熒光素標(biāo)記化轉(zhuǎn)化生長因子β活化激1抗體IgG綿羊山梨脫氫(SDH)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
Anti-Tanis/SELS /FITC 熒光素標(biāo)記炎癥負(fù)調(diào)控因子蛋白抗體IgG綿羊唾液結(jié)合免疫球蛋白樣凝集素10(SIGLEC10)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
Anti-TANK/FITC 熒光素標(biāo)記TANK抗體IgG綿羊CXC趨化因子受體1(CXCR1)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
Anti-Talin/FITC 熒光素標(biāo)記踝蛋白抗體IgG綿羊血管性血友病因子(VWF)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
Anti-Phospho-Talin (Ser425)/FITC 熒光素標(biāo)記化踝蛋白抗體IgG綿羊B活化因子受體(BAFFR)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
Anti-Tau protein/FITC 熒光素標(biāo)記微管相關(guān)蛋白抗體IgG綿羊不均一核糖核蛋白U (HNRPU)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
Anti-Tau protein/FITC 熒光素標(biāo)記微管相關(guān)蛋白抗體IgG綿羊線粒體乙脫氫(ALDM)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
Anti-P-Tau protein (pThr489)/FITC 熒光素標(biāo)記化微管相關(guān)蛋白抗體IgG綿羊纖維膠凝蛋白1(FCN1)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
Anti-phospho-Tau protein (Ser396)/FITC 熒光素標(biāo)記化微管相關(guān)蛋白抗體IgG綿羊封閉蛋白1(CLDN1)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
Anti-phospho-Tau protein (Ser422)/FITC 熒光素標(biāo)記化微管相關(guān)蛋白抗體IgG綿羊纖溶-抗纖溶復(fù)合物(PAP)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
操作步驟:
實(shí)驗(yàn)開始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時(shí),均需混勻,混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測樣品含量,如樣品濃度過高時(shí),應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍,計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
1. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl(在使用前一小時(shí)內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。
3. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
4. 每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液) 100μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。
5. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
7. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng),此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。
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