轉(zhuǎn)氫酶2紫外分光光度法檢測(cè)試劑盒-上海谷研實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	GOY-01S6568

商品屬性：

產(chǎn)品名稱(chēng)	轉(zhuǎn)氫酶2紫外分光光度法檢測(cè)試劑盒
規(guī)格	50管/48樣
檢測(cè)方法	紫外分光光度法
貨號(hào)	GOY-01S6568

商品介紹：

測(cè)定意義

TH位于線(xiàn)粒體的內(nèi)膜上，又稱(chēng)為線(xiàn)粒體復(fù)合體六，催化NADH+NADP+和NAD++NADPH相互轉(zhuǎn)化，調(diào)節(jié)線(xiàn)粒體NAD(H)和NADP(H)平衡。把逆向反應(yīng)稱(chēng)為T(mén)H-2，催化NADPH和NAD+生成NADP+和NADH。

測(cè)定原理：

NADH和NADPH均在340nm有特征吸收，因此TH催化的轉(zhuǎn)氫反應(yīng)不能導(dǎo)致340nm吸光度發(fā)生變化。用人工合成底物3-乙酰吡啶腺嘌呤二核苷酸（APAD+）替代NAD+，TH-2催化APAD+還原生成APADH，APADH在375nm有特征光吸收，測(cè)定375nm光吸收的增加速率，來(lái)計(jì)算TH-2活性。

需自備的儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

實(shí)驗(yàn)方法學(xué)：

一、肝素的配制：

市售肝素凍干粉140單位/mg，1克瓶裝，每瓶140，000單位，稱(chēng)取0.1克肝素凍干粉，加生理鹽水5ml，配成2800單位/ml。取50～100μl濕潤(rùn)管壁，可抗凝人血3～5ml，血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固，所以最好更濃一些。可以取0.1克肝素凍干粉，加3ml生理鹽水溶解后，取50～100μl,可抗凝鼠血2～4ml。

肝素抗凝管的制備：取0.1克肝素凍干粉，加2.5ml生理鹽水。取100μl～150μl滴入塑料或玻璃管中，濕潤(rùn)管壁，低于80℃小烤箱中（可以用烤面包的小烤箱），橫向轉(zhuǎn)動(dòng)，每隔5～10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次，直至干燥后放入4℃保存，可使2～5ml血液不凝固。

二、血液樣本的收集：

全血根據(jù)收集的條件，分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí)，不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱(chēng)之為血清；抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱(chēng)之為血漿。

1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1～2小時(shí)，直接低速離心分離出血清待用或保存。

2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血，輕輕顛倒充分抗凝后，可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征，選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA。

選擇抗凝的注意點(diǎn)：

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致，同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;

②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;

③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多（1ml抗凝全血能分離出0.4～0.5ml血漿）;

④、抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后

用于測(cè)定。

非受體蛋白激2抗體Anti-HIF3A AntibodyYAC-1（小鼠瘤）圖片

腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白5Anti-HIF1A Antibody(原貨號(hào)PB0245)EB-3（人Burkitt瘤）圖片

腫瘤壞死因子CAnti-HIF3A AntibodyA3（人T白血?。┢放?/span>

轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β4抗體Anti-Histidine decarboxylase/HDC AntibodyTE-13（人食管癌）價(jià)格

轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β活化激結(jié)合蛋白1抗體Anti-HK1 AntibodyHCCLM3（人高轉(zhuǎn)移肝癌）圖片

硫氧還蛋白結(jié)合蛋白2抗體Anti-HK2 AntibodyC918（人眼脈絡(luò)黑色素瘤）品牌

MAPK調(diào)控蛋白TRB2抗體Anti-HINT1 AntibodySK-Hep-1（人肝癌）圖片

ATP結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)因子2抗體Anti-HLA-A Antibody(原貨號(hào)PB0407)RM-1（小鼠前列腺癌）圖片

轉(zhuǎn)氫酶2紫外分光光度法檢測(cè)試劑盒G鈉 1650 U/mg LRRC59蛋白抗體Dog IgM/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗犬IgM抗體

D-青霉 99%LRRC41蛋白抗體Dog IgM/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗犬IgM抗體

2-過(guò)氧化丁酮 >52%(GC)促黃體生成素受體抗體Dog IgM/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標(biāo)記的兔抗犬IgM抗體

2-過(guò)氧化丁酮 CP清蛋白α抗體Dog IgM 兔抗犬IgM抗體

鄰二二乙酯 AR,99.5%核纖層蛋白B2抗體DOCK1 質(zhì)分裂付出蛋白1抗體

草酰二 98%層粘蛋白α5抗體DNPK1 DNA依賴(lài)蛋白激催化亞抗體

高嶺土醫(yī)藥級(jí)L-瓜氨抗體Dnmt3a DNA轉(zhuǎn)移-3α抗體

(R)-(-)-3--1,2- 97%泌升高蛋白1抗體Dnmt3 Beta DNA轉(zhuǎn)移-3β抗體

(R)-(+)-縮水甘油 98%溶體相關(guān)膜蛋白4α抗體Dnmt1 DNA轉(zhuǎn)移1抗體

(R)-(+)-縮水甘油 98%分化相關(guān)因14抗體DNMBP 動(dòng)力結(jié)合蛋白DNMBP抗體

(S)-縮水甘油 97%β內(nèi)酰樣蛋白2抗體DNM1L 發(fā)動(dòng)蛋白樣相關(guān)蛋白1抗體

硫安普霉素分析標(biāo)準(zhǔn)品神經(jīng)突觸粘附樣分子4抗體DNase II 脫氧核糖核2抗體

硫安普霉素 95%可溶性半糖凝集素3結(jié)合蛋白抗體DNase I 脫氧核糖核1抗體

伊維茵素 97%瘦素抗體DNase gamma 脫氧核糖核γ抗體

磺 99%脂酯LPIN1抗體DNAPK/PRKDC DNA依賴(lài)蛋白激催化亞抗體

操作步驟:

實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時(shí)，均需混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量，如樣品濃度過(guò)高時(shí)，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋?zhuān)允瓜♂尯蟮臉悠贩显噭┖械臋z測(cè)范圍，計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

1. 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100μl（在使用前一小時(shí)內(nèi)配制），酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。

3. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

4. 每孔加檢測(cè)溶液B工作液（同檢測(cè)A工作液） 100μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。

5. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

6. 依序每孔加底物溶液90μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時(shí)肉眼可見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

7. 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。

8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度（OD值）。