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當(dāng)前位置:上海谷研實(shí)業(yè)有限公司>>生化檢測(cè)試劑盒>>三羧酸循環(huán)系列>> α酮戊二酸脫氫酶(αKGDH)微量法
貨號(hào) | GOY-01S6571 |
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測(cè)定步驟:
1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至450nm。
2、 試劑三的稀釋:將試劑三用蒸餾水稀釋50倍,用多少配多少。(試劑三和蒸餾水1:49稀釋。
3、 工作液配制:在試劑一加入100μl試劑二,充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。(若一次性測(cè)定樣本較少,可按照實(shí)際用量將試劑一和試劑二按照20ml:0.1ml的比例混勻配制)
4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解(溶解后一周內(nèi)用完)。
5、 樣本測(cè)定(在96孔板中依次加入下列試劑)
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后用于測(cè)定。
【友情提示】:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測(cè)。避免給您帶來不必要的損失,請(qǐng)仔細(xì)閱讀購買說明!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 檢測(cè)方法 | 貨號(hào) |
100管/96樣 | 微量法 | GOY-01S6571 |
商品介紹
測(cè)定意義 α-KGDH(EC 1.2.4.2)廣泛存在于動(dòng)物、植物微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體中,是三羧酸循環(huán)調(diào)控關(guān)鍵酶之一,催化α-酮戊二酸氧化脫羧生成琥珀酰。 測(cè)定原理 α-KGDH催化α-酮戊二酸、NAD+ 和生成琥珀酰、 二氧化碳和 NADH,NADH在340 nm有特征吸收峰,以NADH的生成速率表示α-KGDH活性。 需自備的儀器和用品 紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。 |
試劑的組成和配制:
提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:液體 5mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:液體 200μL×1 支,4℃保存;
試劑三:液體 4mL×1 瓶,4℃保存;
試劑四:粉劑×2 瓶,4℃保存。
所需的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測(cè)定:
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)!
1、樣本制備
① 組織樣本:
取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進(jìn)行
勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測(cè)液。
【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進(jìn)行提取
② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本:
先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL
提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);
12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。
【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10
4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測(cè);若渾濁,離心后取上清檢測(cè)。
注意事項(xiàng):
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時(shí)在冰上放置。
2、對(duì)照管只需要做一管。
3、若對(duì)照管吸光值大于 1,建議將試劑二用蒸餾水稀釋 7 倍后使用(10μL 試劑二原液+60μL蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管,對(duì)照管數(shù)值在什么范圍?對(duì)照管的范圍是 0.4-1。對(duì)照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用;
(2)沒有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時(shí)間不夠,可以延長反應(yīng)時(shí)間(反應(yīng)時(shí)間 30min可以延長到 40min)。對(duì)照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般
將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋 10倍后再測(cè),通??梢允箿y(cè)定正常。
聚二乙烯苯多孔小球GDX-102 80-100目液體石蠟 ARAnti-IRF7 /FITC 熒光素標(biāo)記干擾素調(diào)節(jié)因子7抗體IgG
聚二乙烯苯多孔小球GDX-103 40-60目山梨酸 AR,99%Anti-Phospho-IRF7 (Ser471/472) /FITC 熒光素標(biāo)記化干擾素調(diào)節(jié)因子7抗體IgG
聚二乙烯苯多孔小球GDX-103 60-80目 CP,99.0%Anti-IRS-1/FITC 熒光素標(biāo)記胰島素受體底物-1抗體IgG
聚二乙烯苯多孔小球GDX-104 60-80目磺嘧銀 98%Anti-phospho-IRS1(Tyr895)/FITC 熒光素標(biāo)記化胰島素受體底物-1抗體IgG
聚二乙烯苯多孔小球GDX-201 60-80目磺胍 98%Anti-phospho-IRS1(Tyr1222)/FITC 熒光素標(biāo)記化胰島素受體底物-1抗體IgG
聚二乙烯苯多孔小球GDX-301 80-100目磺嘧 分析標(biāo)準(zhǔn)品Anti-phospho-IRS1(Ser1101)/FITC 熒光素標(biāo)記化胰島素受體底物-1抗體IgG
聚二乙烯苯多孔小球GDX-501 60-80目磺嘧 98%Anti-phospho-IRS1(Ser302) /FITC 熒光素標(biāo)記化胰島素受體底物-1抗體IgG
聚二乙烯苯多孔小球GDX-502 40-60目甜蜜素 藥用級(jí)Anti-phospho-IRS1(Ser332/336)/FITC 熒光素標(biāo)記化胰島素受體底物-1抗體IgG
α酮戊二酸脫氫酶(αKGDH)微量法雙(2-二膦乙) 96%Anti-FASN/FITC 熒光素標(biāo)記抗脂肪合成抗體IgG雞解旋樣轉(zhuǎn)錄因子(HLTF)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
(1S,2S)-2-(二膦)環(huán)己 97%Anti-FasL/FITC 熒光素標(biāo)記FasL蛋白抗體IgG雞血管緊張肽A(ATA)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
(1S,2S)-(-)-1, 2-二-1, 2-乙二 98%Anti-FAST kinase/FITC 熒光素標(biāo)記抗Fas活化的絲/蘇氨激抗體IgG雞葡萄糖變位(PGM)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
(1S,2S)-N-(對(duì)磺酰)-1,2-二乙二 98%Anti-FBN1 /FITC 熒光素標(biāo)記原纖維蛋白1抗體IgG雞延伸蛋白A(EloA)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
(1S,2S)-(+)-N,N'-二環(huán)己烷-1,2-二 98%Anti-Fc GammaR II A/CD32a/FITC 熒光素標(biāo)記免疫球蛋白G Fc段受體Ⅱ抗體IgG雞血小板相關(guān)抗體IgM(PA-IgM)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
(1S,2S)-(-)-1,2-環(huán)己二D-鹽 98%Anti-FDC-SP/FITC 熒光素標(biāo)記抗B淋巴表面結(jié)合蛋白抗體IgG雞前列腺素內(nèi)過氧化物合2(PTGS2/COX-2)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
(S,S)-2,6-雙(4-異-2-惡唑啉-2-)吡 99%Anti-Fe65 protein/FITC 熒光素標(biāo)記Fe65 蛋白抗體IgG雞趨化素樣因子超家族成員5(CKLFSF5)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
(S,S)-N-(對(duì)磺酰)-1,2-二乙烷二(對(duì)異)化釕(II) Anti-FGF1/FITC 熒光素標(biāo)記性成纖維生長因子雞白分化抗原CD109(CD109)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
二乙酰[(S)-(-)-2,2'-雙(二-P-酰)-1,1'聯(lián)萘]釕 95%Anti-FGF3/Oncogene INT2 /FITC 熒光素標(biāo)記纖維母生長因子3抗體IgG雞軟骨糖蛋白39(GP39)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
2,2′:6′,2′′-三吡 98%Anti-FGF4/HSTF1/HBGF-4/FITC 熒光素標(biāo)記纖維母生長因子4抗體IgG雞血小板反應(yīng)蛋白2(TSP-2)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
97%Anti-FGF5/FITC 熒光素標(biāo)記纖維母生長因子5抗體IgG雞天青殺素1(AZU1)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
三特丁膦 1.0 M in tolueneAnti-KGF/FGF-7/FITC 熒光素標(biāo)記角質(zhì)形成生長因子受體/纖維母生長因子-7抗體IgG雞白介素3介導(dǎo)核因子(NFIL3)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
三(二亞芐酮)二鈀,加合物 98%Anti-FGF-8/HBGF-8/FITC 熒光素標(biāo)記成纖維生長因子-8/纖維母生長因子-8抗體IgG雞胃蛋白原C(PGC)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
三氟乙酰酮 98%Anti-FGF-13/FITC 熒光素標(biāo)記抗纖維母生長因子-13抗體IgG雞性別決定區(qū)Y框蛋白2(SOX2)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
三(2-)膦 97%Anti-FGF-10/FITC 熒光素標(biāo)記成纖維生長因子-10/纖維母生長因子-10抗體IgG雞S-轉(zhuǎn)移θ1(GSTθ1/GSTt1)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
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