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甲基檸檬酸合酶(MCS)可見分光光度法

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更新時間:2022-04-27 10:02:01瀏覽次數(shù):139次

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貨號 GOY-01S6592
甲基檸檬酸合酶(MCS)可見分光光度法檢測試劑盒公司正在出售的產(chǎn)品:DEPC水 500毫升
DMDC水 500毫升
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DMDC處理試劑盒 100次
RNA樣品儲存液 50毫升
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商品屬性:

產(chǎn)品名稱

甲基檸檬酸合酶(MCS)可見分光光度法檢測試劑盒

規(guī)格

50管/48樣

檢測方法

可見分光光度法

貨號

GOY-01S6592

商品介紹:

測定意義

MCS廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞的線粒體基質(zhì)中,與檸檬酸合酶(CS)共同參與三羧酸循環(huán)的調(diào)節(jié)。

測定原理:

MCS催化丙酰CoA和草酰乙酸產(chǎn)生甲基檸檬酰,進一步水解產(chǎn)生甲基檸檬酸;該反應(yīng)促使無色的DTNB轉(zhuǎn)變成黃色的TNB,在 412nm處有特征吸光值。

需自備的儀器和用品:

可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰、無水乙醇和蒸餾水

實驗方法學(xué):

一、肝素的配制:

市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50100μl濕潤管壁,可抗凝人血35ml,血液不會凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?/span>0.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50100μl,可抗凝鼠血24ml。

肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動,每隔510分鐘轉(zhuǎn)動一次,直至干燥后放入4℃保存,可使25ml血液不凝固。

二、血液樣本的收集:

全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時,不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。

1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置12小時,直接低速離心分離出血清待用或保存。

2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA

選擇抗凝的注意點:

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;

②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;

③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);

④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后

用于測定。

抗抗體 IgM(間接法二步法)Anti-Mevalonate Kinase Antibody人血紅蛋白C(HbC)elisa定量檢測試劑盒

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甲基檸檬酸合酶(MCS)可見分光光度法檢測試劑盒噁唑 98%跨膜蛋白TMED4抗體

2-噻吩乙酰 98%狀受體相關(guān)蛋白3抗體

4-辛炔 99%味覺受體蛋白家族2亞9抗體

十八 ≥97.0% (GC)肥大類胰蛋白β2

草酰 98%化酪氨激B抗體

99%粘附分子1抗體

分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.0% (GC)跨膜蛋白16A/鈣激活離子通道抗體

1,7-辛二炔  98%腫瘤壞死因子-α抗體

十八烷 99%腫瘤蛋白P53誘導(dǎo)蛋白11抗體

十八烷 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5% (GC)味覺2型受體蛋白家族49抗體

十八烷 Standard for GC, ≥99.5% (GC)早期未分化視網(wǎng)膜及晶狀體蛋白EURL抗體

酮三化膦 99%特異激底物蛋白抗體

丁位辛內(nèi)酯  98%微管相關(guān)同源蛋白TPX2抗體

4-戊烯 95%神經(jīng)死亡誘導(dǎo)蛋白激抗體

鍺試劑 97%微管蛋白β tubulin抗體 Tubulin β

操作步驟:

實驗開始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。實驗前應(yīng)預(yù)測樣品含量,如樣品濃度過高時,應(yīng)對樣品進行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍,計算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

1.        加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實驗結(jié)果有效性,每次實驗請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.        棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl(在使用前一小時內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。

3.        溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。

4.        每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液) 100μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。

5.        溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。

6.        依序每孔加底物溶液90μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。

7.       依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng),此時藍色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。

8.       用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。

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