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當(dāng)前位置:上海谷研實(shí)業(yè)有限公司>>生化檢測(cè)試劑盒>>氧化與抗氧化系列>> 二胺氧化酶(DAO)可見分光光度法檢測(cè)試劑盒
貨號(hào) | GOY-01S6430 |
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操作步驟:
實(shí)驗(yàn)開始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時(shí),均需混勻,混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量,如樣品濃度過高時(shí),應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍,計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
1. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100μl(在使用前一小時(shí)內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。
3. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
4. 每孔加檢測(cè)溶液B工作液(同檢測(cè)A工作液) 100μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。
5. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
7. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng),此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度(OD值)。
商品屬性:
產(chǎn)品名稱 | |
規(guī)格 | 50管/24樣 |
檢測(cè)方法 | 可見分光光度法 |
貨號(hào) | GOY-01S6430 |
商品介紹:
測(cè)定意義
DAO(EC1.4.3.6)廣泛存在于動(dòng)物(腸粘膜、肺、肝臟、腎臟等)、植物和微生物中。催化多胺氧化為醛,其活性與核酸和蛋白合成密切相關(guān),能夠反映腸道機(jī)械屏障的完整性和受損傷程度。
測(cè)定原理:
DAO催化尸胺產(chǎn)生醛和過氧化氫,外源添加過量的辣根過氧化物酶,催化過氧化氫氧化鄰聯(lián)茴香胺生成有色物質(zhì),在460nm處有特征吸收峰,通過測(cè)定該波長(zhǎng)吸光度增加速率,計(jì)算DAO活性。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:
天平、低溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、1 mL玻璃比色皿/96孔板、蒸餾水。
實(shí)驗(yàn)方法學(xué):
一、肝素的配制: 市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤(rùn)管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些。可以取0.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。 肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤(rùn)管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。 | 二、血液樣本的收集: 全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。 1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。 2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA。 |
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測(cè)定。
2,4,4-基-1-戊烯 98%蒿本內(nèi)酯 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥90%Anti-Crk p38 (phospho Y221) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠化Crk p38抗體IgG
十一烷 98%分析標(biāo)準(zhǔn)品Anti-DAT1/FITC 熒光素標(biāo)記抗多巴相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子1抗體IgG
十一烷 99% 98%Anti-DBH /FITC 熒光素標(biāo)記多巴β羥化抗體IgG
二乙烯苯 80% 分析標(biāo)準(zhǔn)品Anti-DCC/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗結(jié)直腸癌缺失基因抗體IgG
二乙烯苯 50% 98%Anti-DC-LAMP/LAMP-3/CD208/FITC 熒光素標(biāo)記CD208抗體IgG
二乙烯苯 55%鋁,十八水 Ph. Eur., BP, 100-110%, 51.0-59.0% Al2(SO4)3 Anti-DC-SIGN/CD209/CLEC4L/FITC 熒光素標(biāo)記CD209抗體IgG
納米二氧化錫 99.9% metals basis,50-70nm鋁 99.99% metals basisAnti-DC-SIGNR/CD299/FITC 熒光素標(biāo)記CD299抗體IgG
AMBERLITE IRA402 CL陰離子交換樹脂 氯型赫斯特?zé)晒馊剂希?3258 98%Anti-DCIR/CLEC4A/FITC 熒光素標(biāo)記C型凝集素結(jié)構(gòu)域家族4成員A抗體IgG
二胺氧化酶(DAO)可見分光光度法檢測(cè)試劑盒N,N'-琥珀酰亞碳酯 98%Anti-CLEC2D/OCIL CLEC2D蛋白抗體人端粒逆轉(zhuǎn)錄(TERT)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
4-二氨吡 99%Anti-CD80/B7-1 激分子B7-1蛋白抗體人趨化因子CX3C受體1(CX3XR1)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
4,4'-二氧三 98%Anti-CD71/TFR 轉(zhuǎn)鐵蛋白受體抗體人粘蛋白3(MUC3)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
4,5-二咪唑 98%Anti-B7-1/CD80 激分子B7-1蛋白抗體人趨化素樣因子超家族成員4(CKLFSF4)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
4,5-二咪唑 99%Anti-CD73 胞漿-5′-核苷-Ⅱ抗體人趨化素樣因子超家族成員5(CKLFSF5)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
二吡咯烷(N-琥珀酰亞氨氧)碳六氟鹽 98%Anti-CD79A/IGBP-1 免疫球蛋白結(jié)合蛋白-1抗體人趨化素樣因子超家族成員6(CKLFSF6)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
4-(4,6-二氧三)-4-嗎啉鹽鹽 97%Anti-CD82/KAI1 腫瘤轉(zhuǎn)移抑制蛋白1抗體人趨化素樣因子超家族成員7(CKLFSF7)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
3,5-二叔丁溴 99%Anti-CD83/HB15 CD83抗體人趨化素樣因子超家族成員8(CKLFSF8)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
O-[(乙氧羰)]-N,N,N',N'-四硫尿四氟鹽 98%Anti-CD84/SLAMF5 CD84抗體人趨化素樣因子(CKLF)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
1-乙-(3-二氨)碳二亞鹽鹽 98.5% Anti-CD8 CD8單克隆抗體人粘蛋白4(MUC4)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
2-乙氧-1-乙氧碳酰-1,2-二氫喹啉 99%Anti-CD86/B7-2 CD86抗體人粘蛋白6(MUC6)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
2-氟-1,3-二化咪唑翁六氟酯 97%Anti-CD244 CD244抗體人心臟肌球蛋白結(jié)合蛋白C(MYBPC3)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
乙脒 99%Anti-BLAME/SLAMF8 BLAME抗體人肌球蛋白重鏈10(MYH10)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
四氟代脲六氟酯 98%Anti-Cdc2/CDK1 周期素依賴激1抗體人肌球蛋白重鏈9(MYH9)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
9-芴-N-琥珀酰亞碳酯 98%Anti-Phospho-cdc2 (Thr14) 化周期素依賴激2抗體人肌球蛋白輕鏈9(MYL9)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
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