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當(dāng)前位置:上海谷研實(shí)業(yè)有限公司>>生化檢測試劑盒>>氧化與抗氧化系列>> 超氧陰離子清除能力微量法檢測試劑盒
貨號(hào) | GOY-01S6460 |
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操作步驟:
實(shí)驗(yàn)開始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時(shí),均需混勻,混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測樣品含量,如樣品濃度過高時(shí),應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍,計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
1. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl(在使用前一小時(shí)內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。
3. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
4. 每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液) 100μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。
5. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
7. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng),此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。
商品屬性:
產(chǎn)品名稱 | |
規(guī)格 | 100管/96樣 |
檢測方法 | 微量法 |
貨號(hào) | GOY-01S6460 |
商品介紹:
測定意義
超氧陰離子自由基作為生物體代謝過程中產(chǎn)生的一種自由基,可攻擊生物大分子,如脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、核酸和聚不飽和脂肪酸等,使其交鏈或者斷裂,引起細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的破壞,與機(jī)體衰老和病變有很密切的關(guān)系,清除超氧陰離子自由基的研究已經(jīng)得到了廣泛的關(guān)注。
測定原理:
AP-TEMED系統(tǒng)產(chǎn)生超氧陰離子,與鹽酸羥胺反應(yīng)生成NO2-,NO2-與對(duì)氨基苯磺酸和α-萘胺的作用生成紅色的偶氮化合物,在530nm處有特征吸收峰,樣品對(duì)超氧陰離子的清除能力與530nm的吸光值呈負(fù)相關(guān)。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:
天平、低溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。
實(shí)驗(yàn)方法學(xué):
一、肝素的配制: 市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?/span>0.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。 肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。 | 二、血液樣本的收集: 全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。 1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。 2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA。 |
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測定。
人抗流行性出血熱病抗體IgGAnti-TAF4 Antibody抗腎小球基底膜抗體檢測試劑盒
人痢疾內(nèi)阿米巴抗原Anti-TAF5 Antibody抗雙鏈DNA抗體;天然DNA抗體檢測試劑盒
大鼠堿性成纖維生長因子6Anti-TAF5L Antibody抗體球蛋白A檢測試劑盒
大鼠酸性成纖維生長因子1Anti-TAF6L Antibody抗天然脫氧核糖核酸抗體檢測試劑盒
人萊姆IgGAnti-TAGAP Antibody抗纖維蛋白抗體檢測試劑盒
人空腸彎曲黏附蛋白Anti-TAIP-2 Antibody抗小核糖核蛋白;Sm抗體檢測試劑盒
人衣原體蛋白樣活性因子Anti-TANK Antibody抗心磷脂IgA抗體檢測試劑盒
大鼠凋亡相關(guān)因子Anti-TAL1 Antibody抗心磷脂IgG抗體檢測試劑盒
超氧陰離子清除能力微量法檢測試劑盒雙(六氟乙酮)合銅(II),水合 95%Cy5.5標(biāo)記的兔抗親和素
雙(六氟乙酰酮)合銅(II) 98%Cy7標(biāo)記的兔抗親和素
雙(6,6,7,7,8,8,8,-七氟-2,2-二-3,5-辛二酮)銅 99.99%PE標(biāo)記的兔抗親和素
(二)膦 97%Cy3標(biāo)記的兔抗親和素
(二乙)膦 95%Cy5標(biāo)記的兔抗親和素
二異膦 98%標(biāo)記的兔抗親和素
環(huán)戊二烯雙(三膦)化釕(II) 98%PE-CY5標(biāo)記的兔抗親和素
羰氫三(三膦)釕(II) 97%APC標(biāo)記的兔抗親和素
羰酰二氫三(三膦)釕(II) 99%Alexa Fluor 350標(biāo)記的兔抗親和素
化(茚)雙(三膦)釕(II) Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗親和素
二羰四環(huán)戊二烯釕 96.0%Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗親和素
順-雙(2,2'-二吡)二化釕(II),二水 99%Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗親和素
(五環(huán)戊二烯)釕(II)四聚體 96%PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗親和素
(五環(huán)戊二烯)(環(huán)辛二烯)釕(II) 96%PE-Cy7標(biāo)記的兔抗親和素
雙環(huán)辛烯化銠二聚體 98%Cy3標(biāo)記的兔抗抗體IgG
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