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糖原合成酶(GCS)微量法檢測(cè)試劑盒

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所  在  地上海市

更新時(shí)間:2022-04-28 10:28:27瀏覽次數(shù):166次

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貨號(hào) 微量法
糖原合成酶(GCS)微量法檢測(cè)試劑盒公司正在出售的產(chǎn)品:物理法石蠟切片松動(dòng)組織抗原修復(fù)處理試劑盒 50次
胰蛋白抗原修復(fù)溶液 50毫升
免疫化學(xué)抗體修飾處理試劑專題
抗體熒光標(biāo)記制備試劑盒(見(jiàn)蛋白/抗體標(biāo)記專題) 3次
抗體/蛋白HRP標(biāo)記制備試劑盒 5次
抗體/蛋白AP標(biāo)記制備試劑盒 3次

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商品屬性:

產(chǎn)品名稱

糖原合成酶(GCS)微量法檢測(cè)試劑盒

規(guī)格

100管/96樣

檢測(cè)方法

微量法

貨號(hào)

GOY-01S6980

商品介紹:

測(cè)定意義

GCS(EC 2.4.1.11)催化UDPG和葡萄糖殘基生成糖原和UTP,以α-1,4-糖苷鍵相連延長(zhǎng)糖鏈,是肝和肌肉糖原合成酶的限速酶,是胰島素作用的主要靶酶,對(duì)糖代謝的調(diào)節(jié)和血糖穩(wěn)態(tài)的維持具有重要作用。

測(cè)定原理:

GCS催化UDPG和葡萄糖殘基生成糖原和UTP,丙酮酸激酶和乳酸脫氫酶進(jìn)一步依次催化NADH氧化生成NAD+,在340nm下測(cè)定NADH下降速率,即可反映GCS活性。

需自備的儀器和用品:

分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

實(shí)驗(yàn)方法學(xué):

一、肝素的配制:

市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50100μl濕潤(rùn)管壁,可抗凝人血35ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些。可以取0.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50100μl,可抗凝鼠血24ml

肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤(rùn)管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔510分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使25ml血液不凝固。

二、血液樣本的收集:

全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。

1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置12小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。

2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA。

選擇抗凝的注意點(diǎn):

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;

②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;

③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);

④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后

用于測(cè)定。

溴化亞銅 CP,99.0%柴胡皂苷D 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥98%Anti-GLP-1/KG-31 /FITC  熒光素標(biāo)記胰高血糖素樣肽-1抗體IgG

檸檬酸銅 AR,99.5%五味子甲素 分析標(biāo)準(zhǔn)品,>98% Anti-GLP-2/FITC  熒光素標(biāo)記胰高血糖素樣肽-2抗體IgG

乙酸銅 一水合物  AR,99.0%斯皮諾素 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥97%Anti-GLP-2/FITC  熒光素標(biāo)記胰高血糖素樣肽-2抗體IgG

乙酸銅 一水合物  CP,98.0%五味子乙素 分析標(biāo)準(zhǔn)品,>98%Anti-Glu-Glu Tag/FITC  熒光素標(biāo)記兔抗Glu-Glu Tag標(biāo)簽抗體IgG

溴化銅 AR,99%五味子甲 分析標(biāo)準(zhǔn)品,>98% Anti-GLUR2/FITC  熒光素標(biāo)記谷受體2抗體IgG

溴化銅 99.95% metals basis五味子酯甲 分析標(biāo)準(zhǔn)品,>98% Anti-GLUR3/FITC  熒光素標(biāo)記谷受體3抗體IgG

氫氧化銅 CP,94%五味子素 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥98%Anti-GLUR4/FITC  熒光素標(biāo)記谷受體4抗體IgG

無(wú)水醋酸銅 AR.99.0%延胡索乙素 分析標(biāo)準(zhǔn)品,>97%Anti-GLP-1R/FITC  熒光素標(biāo)記兔抗胰高血糖素樣肽-1受體抗體IgG

糖原合成酶(GCS)微量法檢測(cè)試劑盒大鼠胰島素樣生長(zhǎng)因子1受體(IGF-1R)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

魚(yú)胰島素(INS)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

猴白介素6(IL-6)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

犬多肽YY(PYY)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

CD3分子(CD3)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

β2轉(zhuǎn)鐵蛋白(β2TF)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

抗肝素PF4復(fù)合物抗體/HIT抗體-IgM(HIT)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

大鼠胰蛋白原(Try)免疫試劑盒*直銷

磷脂A2(PL-A2)免疫試劑盒*直銷

超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

操作步驟:

實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時(shí),均需混勻,混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量,如樣品濃度過(guò)高時(shí),應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍,計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

1.        加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.        棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100μl(在使用前一小時(shí)內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。

3.        溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。

4.        每孔加檢測(cè)溶液B工作液(同檢測(cè)A工作液) 100μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。

5.        溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。

6.        依序每孔加底物溶液90μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時(shí)肉眼可見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。

7.       依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng),此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。

8.       用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度(OD值)。



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