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當(dāng)前位置:上海邦景實(shí)業(yè)有限公司>>生化檢測(cè)試劑盒>>輔酶Ⅰ系列>> NAD激酶(NADK)測(cè)試盒微量法
貨號(hào) | BJ-016112-1 |
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產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
產(chǎn)品名稱:NAD激酶(NADK)測(cè)試盒微量法
規(guī)格:100管/48樣
貨號(hào):BJ-016112-1
檢測(cè)方法:微量法
產(chǎn)品分類:輔酶Ⅰ系列
貯存溫度:2~8℃。
本試劑盒保質(zhì)期:6個(gè)月
商品介紹:
測(cè)定意義: NADK(EC 2.7.1.23)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,是目前所發(fā)現(xiàn)的生物體內(nèi)惟一能夠催化NAD+磷酸化生成NADP+的酶,可催化NAD(H)以ATP或無機(jī)多聚磷酸[poly(P)]作為磷?;w進(jìn)行磷酸化反應(yīng),生成NADP(H)。因此,NAD激酶在合成NADP(H)以及調(diào)節(jié)NAD(H)與NADP(H)的平衡上具有重要作用。 測(cè)定原理: NADK催化NAD+磷酸化,生成NADP+;NADP+可被6-磷酸葡萄糖脫氫酶還原為NADPH;NADPH通過PMS的遞氫作用,還原氧化型噻唑藍(lán)(MTT),通過在600 nm下測(cè)定MTT的還原速度(吸光值的變化)可反映出NADK活性的大小。 需自備的儀器和用品: 可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。 |
操作步驟:
本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)開始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時(shí),均需混勻,混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量,如樣品濃度過高時(shí),應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍,計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
1. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100μl(在使用前一小時(shí)內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。
3. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
4. 每孔加檢測(cè)溶液B工作液(同檢測(cè)A工作液) 100μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。
5. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
7. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng),此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。
磷酸化血管生成素受體2抗體大腸埃希氏菌O抗原微量凝集定型血清診斷液NCI-H2087(人非小肺腺癌)
氨酸激酶受體A抗體大腸桿菌KATO III(人胃癌)
促甲狀腺素釋放激素抗體人參土成對(duì)桿菌IAR20(大鼠肝)
端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶抗體白色金針菇HPAC(人胰腺腺泡上皮癌)
甲狀腺激素反應(yīng)蛋白抗體孟氏假單胞菌HFT-8810(人胎兒胸腺株)
跨膜蛋白49抗體大腸埃希菌BNL 1ME A.7R.1(小鼠肝上皮)
腫瘤蛋白D54蛋白抗體傷寒沙菌SH-SY5Y(人神經(jīng)母瘤)
四環(huán)素抗體微小桿菌J774A.1(小鼠單核巨噬)
腫瘤壞死因子-α/TNFα抗體串珠鐮孢G-401(人腎癌Wilms)
踝蛋白抗體交替紅色桿菌屬PA319(人大腸癌)
磷酸化踝蛋白抗體矮被孢霉Vero(非洲綠猴腎)
驅(qū)動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白1抗體金耳K7M2 wt(小鼠骨肉瘤成骨)
瞬時(shí)受體電位離子通道蛋白6抗體釀酒酵母BC3H1(小鼠腦瘤)
磷酸化微管相關(guān)蛋白抗體豇豆慢生根瘤菌293E(人胚腎(EBNA1基因修飾))
四分子交聯(lián)體5抗體藤倉鐮孢VE(人血管內(nèi)皮)
NAD激酶(NADK)測(cè)試盒微量法擴(kuò)張性共濟(jì)失調(diào)突變因子(ATM)試劑盒 Anti-CFB Antibody三磷酸腺苷受體受體P2X1
軸蛋白抑制蛋白2(AXIN2)試劑盒Anti-CFD Antibody三磷酸腺苷受體P2X5
抗心磷脂IgA(ACA-IgA)試劑盒 Anti-CFD Antibody三磷酸腺苷受體P2X5b
轉(zhuǎn)錄激活因子-4(ATF-4)試劑盒 Anti-CFL1 Antibody三磷酸腺苷受體P2X6
去唾液酸糖蛋白受體2(ASGR2)試劑盒Anti-CFD Antibody突觸富含酸膜蛋白7
多效生長(zhǎng)因子(PTN)試劑盒Anti-CFI Antibody過氧化物酶體生成蛋白5相關(guān)蛋白
延伸蛋白A(EloA)試劑盒 Anti-CFL1 Antibody(PB0035)G蛋白偶聯(lián)嘌呤受體p2y6
特點(diǎn):
(1)應(yīng)用廣泛
由于各種各樣的無機(jī)物和有機(jī)物在紫外可見區(qū)都有吸收,因此均可借此法加以測(cè)定。到目前為止,幾乎化學(xué)元素周期表上的所有元素(除少數(shù)放射性元素和惰性元素之外)均可采用此法。
(2)靈敏度高
由于相應(yīng)學(xué)科的發(fā)展,使新的有機(jī)顯色劑的合成和研究取得可喜的進(jìn)展,從而對(duì)元素測(cè)定的靈敏度大大提高了一步。特別是由于多元絡(luò)合物和各種表面活性劑的應(yīng)用研究,使許多元素的摩爾吸光系數(shù)由原來的幾萬提高到幾十萬。相對(duì)于其它痕量分析方法而言,光度法的精密度和準(zhǔn)確度一致*是比較高的。不但在實(shí)際工作中光度法被廣泛采用,在標(biāo)準(zhǔn)參考物質(zhì)的研制中,它更受重視,很多光度分析法已制定成為標(biāo)準(zhǔn)方法。
(3)選擇性好
目前已有些元素只要利用控制適當(dāng)?shù)娘@色條件就可直接進(jìn)行光度法測(cè)定,如鈷、鈾、鎳、銅、銀、鐵等元素的測(cè)定,已有比較滿意的方法了。
(4)準(zhǔn)確度高
對(duì)于一般的分光光度法來說,其濃度測(cè)量的相對(duì)誤差在1-3%范圍內(nèi),如采用示差分光度法測(cè)量,則誤差往往可減少到千分之幾。
(5)適用濃度范圍廣
可從常量(1-50%)(尤其是使用示差法)到痕量(10-6-10-8%)(經(jīng)預(yù)富集后)。
(6)分析成本低、操作簡(jiǎn)便、快速
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