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產(chǎn)品介紹：

血清血漿microRNA提取試劑盒

描述：血清血漿 miRNA 提取試劑盒是目前提取小 RNA（<200nt）操作步驟簡單、重復(fù)性最好、小 RNA 產(chǎn) 率最高的方法之一。使用該試劑盒通過一步上柱即可獲得高 純度 miRNA，可在 10min 左右完成小 RNA 的提?。磺沂褂?該試劑盒提取的小 RNA（Small RNA）中，長度在 15～200nt 范圍的 RNA 在 95%以上，基本不含有大 RNA 和 DNA，可 直接用于后續(xù)的反轉(zhuǎn)錄、Northern 雜交、測序等應(yīng)用。

儲存：室溫可保存 2 年。
使用防護建議：Serum/Plasma miRNA Reagent 溶液中含有胍鹽，其具有強烈的腐蝕性，試驗時請務(wù)必佩戴防護眼鏡、手套、口罩等防護措施，如有皮膚接觸請立即用大量清水沖洗，再另行就醫(yī)。
自備試劑：異丙醇、乙醇、75%異丙醇、2ml EP 管
操作方法：
(1) 向 1.5ml EP 管中加入 800μl Serum/Plasma miRNAReagent。將 300μl 血清或血漿樣本加入到上述 800μlmiRNA Reagent A 中，用腕力混勻 30s,室溫放置 5min。
(2) 13,000rpm 離心5min，將上清約 1ml 吸入到新的 2ml EP管中。加入 1ml 異丙醇，上下顛倒混合均勻。
(3) 將上述溶液分三次加至吸附柱中（每次約 700μl），13,000rpm 離心 15s，倒掉過柱液。
(4) 向吸附柱中加入700μl 75%異丙醇洗滌一次，13,000rpm離心 15s，倒掉過濾液。
(5) 向吸附柱中加入 500μl 無水乙醇洗滌一次，13,000rpm離心 15s，倒掉過濾液。
(6) 吸附柱 13,000rpm 空離心 2min，去掉殘留的乙醇。
(7) 將吸附柱放入到新 1.5ml EP 管中，室溫放置 2min，使殘留乙醇揮發(fā)。在吸附柱濾芯上加入 30μl RnaseFree H2O，室溫靜置 2min，13,000rpm 離心 2min，洗脫產(chǎn)物即為提取的 miRNA。
常見問題匯總：
(1) 由于血清血漿中的 miRNA 含量極低，提取的 miRNA 濃度通常在 5 ng/μl 以下，因此難以用常規(guī)的 NanoDrop 測量濃度，建議直接使用 10 μl 進行下游反轉(zhuǎn)錄。由于本試劑盒提取的是小 RNA，該濃度下的 miRNA Copy 數(shù)足以進行下游檢測。
(2) 由于血清血漿中 miRNA 的含量低，為了獲得更可靠的實驗數(shù)據(jù)，建議使用特異性和靈敏度更好的 TaqMan 探針法進行 miRNA 的下游檢測。本試劑盒提取的 miRNA 并不限于其它檢測方法和用途，包括 SYBR Green 法檢測、二代測序、芯片等檢測領(lǐng)域。
(3) 血清血漿 TaqMan miRNA 反轉(zhuǎn)錄試劑盒為血清血漿專用，不可用于細胞和組織的 miRNA 檢測實驗。

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