活細胞染色液(Hoechst 33342)(100×)-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X9554

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：活細胞染色液(Hoechst 33342)(100×)

英文名稱：Hoechst 33342 Living Cell Staining Solution

產(chǎn)品規(guī)格：0.1ml|0.5ml|3ml

貨號：FS-X9554

產(chǎn)品介紹:

本品是一種適用于活細胞細胞核染色的溶液。僅需染色10分鐘就能用熒光顯微鏡觀察到非常明亮的細胞核藍色熒光染色。本產(chǎn)品也適用于固定后的細胞或組織的細胞核染色。

：23491-52-3

分子式：C27H28N6O·3HCl·3H2O

分子量：615.99

激發(fā)和發(fā)射波長：346nm，460nm

激發(fā)和發(fā)射波長(和雙鏈DNA結(jié)合后)：350nm，461nm

Hoechst 33342是一種可以穿透細胞膜的藍色熒光染料，對細胞的毒性較低。Hoechst 33342染色常用于細胞凋亡檢測，染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細胞儀檢測。Hoechst 33342也常用于普通的細胞核染色，或常規(guī)的DNA染色。

正常培養(yǎng)的HeLa細胞用本產(chǎn)品染色后的實拍效果圖。圖A為正常細胞Hoehst 33342的染色效果圖。圖B中除了正常細胞外，還清晰可見呈現(xiàn)致密濃染的凋亡細胞。

儲存條件：-20℃避光，有效期一年。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

多肽-N-乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移mei11(GALNT11)檢測試劑盒 forPolypeptide-N-Acetylgalactosaminyltransferase11(GALNT11)

ⅩⅢA1肽(F13A1)檢測試劑盒 forCoagulationFactorXIIIA1Polypeptide(F13A1)

Ⅱ型膠原(COL2)檢測試劑盒 forCollagenTypeII(COL2)

組織蛋白meiK(CTSK)檢測試劑盒 forCathepsinK(CTSK)

載脂蛋白B100(APOB100)檢測試劑盒 forApolipoproteinB100(APOB100)

Malectin蛋白(MLEC)檢測試劑盒 forMalectin(MLEC)

MAX交互子1(MXI1)檢測試劑盒 forMAXInteractor1(MXI1)

CD320分子(CD320)檢測試劑盒 forClusterOfDifferentiation320(CD320)

Trihydrophobin1蛋白(TH1)檢測試劑盒 forTrihydrophobin1(TH1)

半乳糖變旋mei(GALM)檢測試劑盒 forGalactoseMutarotase(GALM)

三葉因子2(TFF2)檢測試劑盒 forTrefoilFactor2(TFF2)

谷丙轉(zhuǎn)氨mei(ALT)檢測試劑盒 forAlanineAminotransferase(ALT)

冠蛋白1A(CORO1A)檢測試劑盒 forCoronin1A(CORO1A)

細胞間粘附分子4(ICAM4)檢測試劑盒 forIntercellularAdhesionMolecule4(ICAM4)

肽mei抑制因子15(PI15)檢測試劑盒 forPeptidaseInhibitor15(PI15)

補體成分5a(C5a)檢測試劑盒 forComplementComponent5a(C5a)

血管內(nèi)皮生長因子A(VEGFA)檢測試劑盒 forVascularEndothelialGrowthFactorA(VEGFA)
活細胞染色液(Hoechst 33342)(100×)fu西汀相關(guān)物質(zhì)A標準品規(guī)格:15mg 英文名稱：

霉酚suan酯相關(guān)物質(zhì)B標準品規(guī)格:15mg 英文名稱：

2-丁tong¤標準品規(guī)格:1.2ml×3ampules 英文名稱：Methyl Ethyl Ketone

仲丁chun標準品規(guī)格:1.2ml×3ampules 英文名稱：2-Butanol

2-jia基-1-丙chun標準品規(guī)格:1.2ml×3ampules 英文名稱：2-Methyl-1-propanol

fu馬西尼標準品規(guī)格:200mg 英文名稱：Flumazenil

鹽suan特比萘芬標準品規(guī)格:200mg 英文名稱：Terbinafine Hydrochloride

紫杉chun相關(guān)物質(zhì)B標準品規(guī)格:20mg 英文名稱：

卡立普多標準品規(guī)格:1g 英文名稱：Carisoprodol

他啶五水合物標準品規(guī)格:300mg 英文名稱：Ceftazidime Pentahydrate
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)