轉(zhuǎn)染試劑-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X9727

產(chǎn)品介紹:

產(chǎn)品優(yōu)勢：

◆ 一步轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染前和轉(zhuǎn)染后均不需要換液，操作簡單；

◆ 高轉(zhuǎn)染效率，低細胞毒性，對細胞生長無影響；

◆ 對貼壁細胞和懸浮細胞的瞬時轉(zhuǎn)染或穩(wěn)定轉(zhuǎn)染均有效；

◆ 適用于微孔板轉(zhuǎn)染，也適用于生物反應(yīng)器的大量轉(zhuǎn)染；

◆ 高效轉(zhuǎn)染很多細胞，如293, CHO, COS-7, HeLa, HepG2, MDCK, PC12, HT29, NIH-3T3, MCF7, Vero,SF9等。

保存條件：4°保存，一年有效。

中文名稱：轉(zhuǎn)染試劑

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：0.75ml/1ml/1.5ml

貨號：FS-X9727

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學(xué)檢測。

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白介16(IL-16)英文名：IL-16 AU5 tag標簽抗體包裝1g

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磷化促腎上腺皮質(zhì)激ACTH抗體基質(zhì)金屬蛋白10(MMP10)ELR510444是新型微管阻斷劑，抑制MDA-MB-231增殖的IC50值為30.9nM，非P-gp底物分子。
轉(zhuǎn)染試劑蠟樣芽孢桿 N-3,4-二苯(基)硫脲抗肝腎微粒體抗體

板栗蛇孢日規(guī)殼 4-叔丁基苯基異酸酯抗肝PF4復(fù)合物抗體;HIT抗體

高加索異常倚囊霉 5-溴-2-甲基-4-硝基-1H-咪唑抗肝特異性脂蛋白抗體

外來毛霉橙色變種 2--1,3-二溴苯抗肝膜抗體

累四菲鏈霉反-4,4'-二溴芪抗核抗體

鞘氨桿屬 5--2-并惡唑抗核周因子抗體

三葉草根瘤 4-異喹啉酸抗環(huán)瓜氨酸肽抗體

棒桿溴化1-癸基-3-甲基咪唑抗肌聯(lián)蛋白抗體

黃灰鏈霉 5-甲基噻吩-2-羧酸抗甲型肝炎病IgG抗體

云芝栓孔（變色栓） 4-溴-2-氟芐抗甲型肝炎病IgM抗體

鐘器腐霉 1,4-二硝基咪唑抗甲狀腺過氧化物抗體

黑曲霉啶?？辜谞钕偾虻鞍卓贵w

頭孢屬 5-甲氧基-2-呋喃甲抗甲狀腺微粒體抗體

類諾卡氏 2,3-二-4-抗角蛋白絲聚集;絲集蛋白抗體

點枝頂孢 1-甲基-3-乙酸抗酸性磷酸

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