細胞活性檢測試劑盒-綠色熒光-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X9722

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：細胞活性檢測試劑盒-綠色熒光

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：500T|1000T

貨號：FS-X9722

產(chǎn)品介紹:

綠色熒光細胞活性檢測試劑盒是采用C01細胞活性探針檢測細胞活性的試劑盒。C01細胞活性探針是一種可以對活細胞進行熒光標記的細胞活性染色試劑，當C01熒光探針其進入到細胞質(zhì)后，酯酶會將其水解并留在細胞內(nèi),發(fā)出強綠色熒光，熒光強度與活細胞數(shù)量成正比。

C01細胞活性探針是一種性合成的綠色熒光探針，其本身熒光極低，進入活性細胞并被活細胞的酯酶剪切生成強綠色熒光的產(chǎn)物。綠色熒光產(chǎn)物的的激發(fā)和發(fā)射波長分別為488nm和520nm。C01細胞活性探針的細胞毒性很低，不會抑制任何的細胞功能如增殖。使用C01細胞活性探針的活性檢測的實驗結(jié)果與標準的51Cr-釋放法所得結(jié)果相一致。

儲存條件：C01探針-20℃防潮避光保存；

探針稀釋液2-8℃保存。

探針稀釋液長期不用可以-20℃保存。

有效期：一年。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

成纖維細胞生長因子4(FGF4)英文名：FGF4 艾滋病病制約錨定蛋白抗體包裝5g

成纖維細胞生長因子13(FGF-13)英文名：FGF-13 腺苷環(huán)化1抗體包裝1g

成纖維細胞生長因子10(FGF10)英文名：FGF10 核糖核L抑制蛋白抗體包裝5g

超氧化物歧化(SOD)英文名：SOD Rho GTP激活蛋白24抗體包裝25g

超敏C反應蛋白(hs-CRP)英文名：hs-CRP GTP激活蛋白ASAP3抗體包裝5g

腸脂肪結(jié)合蛋白(iFABP)英文名：iFABP 激活受體1C抗體包裝25g

叉頭框蛋白03(FoxP3)英文名：FoxP3 整合樣金屬蛋白與凝血13型抗體包裝1g

層連蛋白/板層(LN)英文名：LN 去整合樣金屬蛋白11抗體包裝25g

草胺膦乙酰轉(zhuǎn)移(PAT)英文名：PAT 去整合樣金屬蛋白12抗體包裝5g

不對稱二基精(ADMA)英文名：ADMA 去整合樣金屬蛋白15抗體包裝1g

補體因子H(CFH)英文名：CFH 去整合樣金屬蛋白2抗體包裝25g

補體片斷5a(C5a)英文名：C5a 載脂蛋白E2受體抗體包裝5g

補體片斷3a(C3a)英文名：C3a 腺苷A1受體抗體包裝100g

補體蛋白5(C5)英文名：C5 通道蛋白0抗體包裝1g

補體蛋白4(C4)英文名：C4 轉(zhuǎn)錄因子AP-2γ抗體包裝25g

淀粉樣肽前體蛋白抗體結(jié)締組織生長因子(CTGF)Isoindigotin is used in the therapy of Y.
細胞活性檢測試劑盒-綠色熒光棒桿 5-溴-3-氟-2(1H)-吡啶酮甲胎蛋白異質(zhì)體3

紅緣層孔 2,5-二溴-3-氟吡啶甲肟前列腺D2

異配囊接霉 3-溴-2-氟甲狀旁腺

達里湖芽孢桿 4-芐氧基-3,5-二氟苯酸甲狀腺抗體;甲狀腺激球蛋白

蒂蓋姆頭珠霉乙酰酮鈰水合物甲狀腺激阻斷抗體

相思根瘤 2,3-二氟-4-丁氧基苯酸甲狀腺過氧化物

那波鏈霉 5-溴-7-甲基-1H-吲唑甲狀腺結(jié)合球蛋白

氨酸棒桿呋喃酚甲狀腺鈉轉(zhuǎn)運體

平菇 6-羧基六熒光甲狀腺球蛋白

羅爾細薄 6-羧基四熒光甲狀腺受體相互作用蛋白6

根腐平臍蠕孢 4-(三氟甲基)鹽酸鹽甲狀腺

布氏乳桿 2,6-二氟吡啶-3-甲間變性瘤激

psilent-dual1(pSD1) 5,10-二氫-5,10-二甲基吩間皮

哈氏弧三聚聚磷酸鹽堿性成纖維生長因子

銅綠假單胞(綠膿桿)* 對異丁堿性成纖維生長因子9
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)