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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>細(xì)胞凋亡與增殖>> CCK-8反應(yīng)終止液
活細(xì)胞染色液(Hoechst 33342)(100×)
細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒(WST-1法)
貨號(hào) | FS-X9723 |
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中文名稱(chēng):CCK-8反應(yīng)終止液
英文名稱(chēng):
產(chǎn)品規(guī)格:500T|1000T
貨號(hào):FS-X9723
產(chǎn)品介紹:
反應(yīng)終止液用于在做CCK-8實(shí)驗(yàn)時(shí),如果暫時(shí)不測(cè)定O.D值,打算以后測(cè)定或?yàn)榱吮苊饷看螠?zhǔn)備標(biāo)準(zhǔn)曲線,可以加入Stop Solution,并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在0-5℃條件下,在7天內(nèi)測(cè)定吸光度即可。 儲(chǔ)存條件:2-8℃避光保存。 注意: 1.長(zhǎng)期存放請(qǐng)分裝后-20℃避光保存。 2.避免反復(fù)凍融。 3.凍存后溶解時(shí)注意重新混勻。 有效期:一年。 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
補(bǔ)體蛋白3(C3)英文名:C3 血管生成相關(guān)蛋白5包裝5g
補(bǔ)體C4(C4)英文名:C4 錨蛋白重復(fù)域53抗體包裝1g
補(bǔ)體1抑制物抗體(C1INH)英文名:C1INH 錨蛋白重復(fù)域54抗體包裝1g
波形蛋白(VIM)英文名:VIM ELISA Kiβ5抗體包裝1g
脫氫E1(PDH E1)英文名:PDH E1 肌側(cè)索硬化癥相關(guān)蛋白3抗體包裝5g
激M2型同工(M2-PK)英文名:M2-PK 腺苷A2b受體/神經(jīng)生長(zhǎng)因子1受體抗體包裝10MG
激(PK)英文名:PK 肌側(cè)索硬化癥相關(guān)蛋白1抗體包裝1g
二單酰(malonyl CoA)英文名:malonyl CoA β淀粉樣前體蛋白結(jié)合蛋白2抗體(X11β)包裝5g
二醛(MDA)英文名:MDA 乙酰結(jié)合蛋白抗體包裝100g
轉(zhuǎn)/谷轉(zhuǎn)(ALT/GPT)英文名:ALT/GPT 磷化分裂周期蛋白16抗體包裝25g
轉(zhuǎn)(ALT)英文名:ALT 白血病相關(guān)蛋白AHI1抗體包裝1g
表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)英文名:EGFR 活化誘導(dǎo)胞嘧啶核苷脫抗體包裝5g
表皮生長(zhǎng)因子(EGF)英文名:EGF 三磷腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白9抗體包裝1g
吡啶交聯(lián)物(PY)英文名:PY ADP核糖基化因子3抗體包裝100g
(LPA)英文名:LPA 含酰tRNA合成結(jié)構(gòu)域1抗體包裝25g
通道蛋白-2抗體骨成型蛋白2(BMP2)Idelalisib (CAL-101; GS-1101) 是一種口服有效的高選擇性 p110δ 抑制劑,IC50 為 2.5 nM,比 p110δ 和其他 P
CCK-8反應(yīng)終止液產(chǎn)色葡萄球 1,5-二氨基-2-甲基戊烷堿性磷酸
變異鹽單胞 2--4-羥基-5-氟嘧啶降鈣
裂褶 N,N-二甲基四氟乙降鈣基因相關(guān)肽
沙壤土桿 1-BOC-4-降鈣原
東方伊薩酵母 N-[1-[5-O-[二(4-甲氧基苯基)苯甲基]-2-脫氧-2-氟-BETA-D-阿拉伯呋喃糖基]降脂
蘇云金芽胞桿 2-[(2,4-二)甲基]-1H-苯并咪唑膠原I
大腸埃希氏 依法韋侖膠原II
果生鏈核盤(pán) 4-溴-3,6-噠二酮膠質(zhì)系來(lái)源的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子
Nitriliruptor 1-Boc-4-酸角蛋白,II型骨架1b
葡萄座腔 2-(1H-咪唑-1-基)乙鹽酸鹽角化生長(zhǎng)因子
馬賽 7-氨基-1,2,3,4-四氫喹啉窖蛋白Caveolin1
棒桿 6,7-二氫-6-巰基-5H-吡唑并[1,2-α][1,2,4]三氮唑化物接觸蛋白1
短波單胞 爾它培南鈉結(jié)腸癌抗原
草菇 4-溴結(jié)蛋白
釀酒酵母 3-吡唑羧酸甲酯結(jié)締組織生長(zhǎng)因子
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