CCK-8反應終止液-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X9723

中文名稱：CCK-8反應終止液

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：500T|1000T

貨號：FS-X9723

產(chǎn)品介紹:

反應終止液用于在做CCK-8實驗時，如果暫時不測定O.D值，打算以后測定或為了避免每次準備標準曲線，可以加入Stop Solution，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在0-5℃條件下，在7天內(nèi)測定吸光度即可。

儲存條件：2-8℃避光保存。

注意：

1．長期存放請分裝后-20℃避光保存。

2．避免反復凍融。

3．凍存后溶解時注意重新混勻。

有效期：一年。

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

補體蛋白3(C3)英文名：C3 血管生成相關蛋白5包裝5g

補體C4(C4)英文名：C4 錨蛋白重復域53抗體包裝1g

補體1抑制物抗體(C1INH)英文名：C1INH 錨蛋白重復域54抗體包裝1g

波形蛋白(VIM)英文名：VIM ELISA Kiβ5抗體包裝1g

脫氫E1(PDH E1)英文名：PDH E1 肌側(cè)索硬化癥相關蛋白3抗體包裝5g

激M2型同工(M2-PK)英文名：M2-PK 腺苷A2b受體/神經(jīng)生長因子1受體抗體包裝10MG

激(PK)英文名：PK 肌側(cè)索硬化癥相關蛋白1抗體包裝1g

二單酰(malonyl CoA)英文名：malonyl CoA β淀粉樣前體蛋白結合蛋白2抗體（X11β）包裝5g

二醛(MDA)英文名：MDA 乙酰結合蛋白抗體包裝100g

轉(zhuǎn)/谷轉(zhuǎn)(ALT/GPT)英文名：ALT/GPT 磷化分裂周期蛋白16抗體包裝25g

轉(zhuǎn)(ALT)英文名：ALT 白血病相關蛋白AHI1抗體包裝1g

表皮生長因子受體(EGFR)英文名：EGFR 活化誘導胞嘧啶核苷脫抗體包裝5g

表皮生長因子(EGF)英文名：EGF 三磷腺苷結合盒轉(zhuǎn)運蛋白9抗體包裝1g

吡啶交聯(lián)物(PY)英文名：PY ADP核糖基化因子3抗體包裝100g

(LPA)英文名：LPA 含酰tRNA合成結構域1抗體包裝25g

通道蛋白-2抗體骨成型蛋白2(BMP2)Idelalisib (CAL-101; GS-1101) 是一種口服有效的高選擇性 p110δ 抑制劑，IC50 為 2.5 nM，比 p110δ 和其他 P
CCK-8反應終止液產(chǎn)色葡萄球 1,5-二氨基-2-甲基戊烷堿性磷酸

變異鹽單胞 2--4-羥基-5-氟嘧啶降鈣

裂褶 N,N-二甲基四氟乙降鈣基因相關肽

沙壤土桿 1-BOC-4-降鈣原

東方伊薩酵母 N-[1-[5-O-[二(4-甲氧基苯基)苯甲基]-2-脫氧-2-氟-BETA-D-阿拉伯呋喃糖基]降脂

蘇云金芽胞桿 2-[(2,4-二)甲基]-1H-苯并咪唑膠原I

大腸埃希氏依法韋侖膠原II

果生鏈核盤 4-溴-3,6-噠二酮膠質(zhì)系來源的神經(jīng)營養(yǎng)因子

Nitriliruptor 1-Boc-4-酸角蛋白，II型骨架1b

葡萄座腔 2-(1H-咪唑-1-基)乙鹽酸鹽角化生長因子

馬賽 7-氨基-1,2,3,4-四氫喹啉窖蛋白Caveolin1

棒桿 6,7-二氫-6-巰基-5H-吡唑并[1,2-α][1,2,4]三氮唑化物接觸蛋白1

短波單胞爾它培南鈉結腸癌抗原

草菇 4-溴結蛋白

釀酒酵母 3-吡唑羧酸甲酯結締組織生長因子

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